粉防己堿對(duì)人肝癌HepG2-細(xì)胞增殖與凋亡的影響實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：⑴通過觀察中草藥粉防己堿對(duì)人肝癌HepG-2細(xì)胞增殖的影響，闡明粉防己堿是否對(duì)人肝癌HepG-2細(xì)胞有抑制作用，而且也可為臨床用藥治療腫瘤提供一定的參考;⑵通過實(shí)驗(yàn)觀察粉防己堿對(duì)人肝癌HepG-2細(xì)胞的增殖周期、凋亡以及相關(guān)凋亡基因bad表達(dá)的影響，從基因水平為粉防己堿的抑癌作用提供理論依據(jù)。
　　 方法：實(shí)驗(yàn)分組如下;實(shí)驗(yàn)組分為5組（不同藥物濃度）、空白對(duì)照組、陰性對(duì)照組?？瞻讓?duì)照組為加PBS組，陰性對(duì)照組為藥物終濃度為

2、0 mg/L的細(xì)胞組，以藥物濃度分別為5.0、10、15、20和25 mg/L為實(shí)驗(yàn)組分別處理HepG-2細(xì)胞，作用時(shí)間分別為24h、48h、72h以后，應(yīng)用噻唑藍(lán)(MTT)比色法觀察各組藥物對(duì)細(xì)胞的抑制作用，流式細(xì)胞術(shù)(FCM)觀測(cè)粉防己堿對(duì)人肝癌HepG-2細(xì)胞周期以及凋亡的影響，PCR檢測(cè)粉防己堿對(duì)人肝癌HepG-2細(xì)胞bad促凋亡基因表達(dá)水平的影響。
　　 結(jié)果：①噻唑藍(lán)(MTT)比色法檢測(cè)表明:粉防己堿對(duì)人肝癌HepG

3、-2細(xì)胞有顯著抑制作用。24h、48h和72h時(shí)各實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組OD值兩兩比較，差別均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），20mg/L組、25mg/L組在24h、48h和72h時(shí)間點(diǎn)OD值兩兩比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，10mg/L組、15mg/L組、20mg/L組、25mg/L組各組分別在48h和72h時(shí)間點(diǎn)的OD值兩兩比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），而5.0mg/L組的OD值在24h和48h時(shí)間點(diǎn)兩兩比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.0

4、5）（見表3.1）。②流式細(xì)胞術(shù)法檢測(cè)結(jié)果顯示粉防己堿(5.0mg/L、10mg/L、15mg/L)作用于人肝癌HepG-2細(xì)胞后，可使肝癌細(xì)胞發(fā)生凋亡，如圖中所示可見到明顯的細(xì)胞凋亡峰值出現(xiàn)，各組凋亡率分別為1.613％、10.143％、11.230％和19.383％，細(xì)胞凋亡率隨藥物濃度的增加而增大;粉防己堿在5mg/L、10mg/L、15mg/L濃度時(shí)，G0-G1期細(xì)胞的數(shù)量明顯高于對(duì)照組，而S期細(xì)胞則明顯少于對(duì)照組，并且隨著藥物

5、濃度的增加，差異越明顯，呈現(xiàn)出一定的濃度-效應(yīng)關(guān)系，實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組兩兩比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。③聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:隨著粉防己堿藥物終濃度的增大，bad凋亡基因表達(dá)量也逐漸增加，而且實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組之間兩兩比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），說明粉防己堿可能通過增加bad凋亡基因表達(dá)而發(fā)揮誘導(dǎo)人肝癌HepG-2細(xì)胞凋亡的作用。
　　 結(jié)論：⑴噻唑藍(lán)(MTT)比色法實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，粉防己堿對(duì)人肝癌HepG-

6、2細(xì)胞的增殖有明顯地抑制效應(yīng)。并且在一定濃度范圍內(nèi)時(shí)，隨著藥物濃度的增加，藥物的抑制作用越明顯，存在著一定的劑量-效應(yīng)關(guān)系;無明顯時(shí)間依賴性。⑵流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果說明粉防己堿有誘導(dǎo)人肝癌細(xì)胞凋亡的作用。粉防己堿可通過阻滯細(xì)胞周期的有序進(jìn)行而抑制了人肝癌HepG-2細(xì)胞增殖，從而發(fā)揮誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的作用。⑶PCR檢測(cè)結(jié)果顯示:隨著粉防己堿藥物濃度的逐漸增加，bad促凋亡基因表達(dá)量亦相應(yīng)的隨著增多，由此可證實(shí)粉防己堿可能通過增加bad凋亡基因