柴胡注射液對(duì)人肝癌細(xì)胞HepG-,2-增殖及凋亡的影響.pdf

1、本文從中醫(yī)經(jīng)典古籍入手，對(duì)歷代醫(yī)書及當(dāng)代醫(yī)家有關(guān)肝癌的文獻(xiàn)進(jìn)行了整理研究，從病名沿革、病因病機(jī)等方面梳理其學(xué)術(shù)發(fā)展脈絡(luò)，并重點(diǎn)闡述了柴胡注射液與肝癌治療之間的關(guān)系，提出了柴胡注射液能抑制人肝癌細(xì)胞的增殖及促進(jìn)其凋亡的觀點(diǎn)。 目的： 本實(shí)驗(yàn)采用柴胡注射液作用于體外培養(yǎng)的人肝癌細(xì)胞株HepG2，抑制其增殖，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，并從分子水平探討其發(fā)生的可能機(jī)制。 方法： 1、柴胡注射液抑制人肝癌細(xì)胞株HepG2增殖的

2、實(shí)驗(yàn)研究。 1.1空白對(duì)照組(含10％小牛血清的1640培養(yǎng)液)和氟尿嘧啶陽(yáng)性對(duì)照組(血峰濃度10μg/L)，及柴胡注射液3mg/ml、5mg/ml、10mg/ml、25mg/ml、50mg/ml不同濃度實(shí)驗(yàn)組。 1.2噻唑藍(lán)比色法(MTT)檢驗(yàn)人肝癌細(xì)胞株HepG2對(duì)柴胡注射液的藥物及對(duì)氟尿嘧啶注射液敏感性。 1.3應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測(cè)人肝癌細(xì)胞株HepG2周期的改變。 2、柴胡注射液誘導(dǎo)Hep

3、G2細(xì)胞凋亡研究。 2.1應(yīng)用倒置顯微鏡、熒光顯微鏡觀察細(xì)胞凋亡形態(tài)的改變。 2.2應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡率。 2.3一步法TUNEL檢測(cè)細(xì)胞凋亡率。 結(jié)果： 1、柴胡注射液對(duì)HepG2的生長(zhǎng)有明顯的抑制作用，并誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生凋亡，MTT檢測(cè)表明柴胡注射液對(duì)人肝癌細(xì)胞的增殖有劑量——效應(yīng)關(guān)系，隨濃度的升高，抑制率增高，其半數(shù)抑制濃度為(IC50)約為50mg/ml。 柴胡注射液微劑量(3

4、mg/ml)與空白對(duì)照組之間無(wú)顯著性差異，柴胡注射液25mg/ml組與陽(yáng)性對(duì)照組氟尿嘧啶組之間無(wú)顯著性差異，其他各組之間進(jìn)行兩兩比較，均有顯著性差異。 根據(jù)流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果提示，當(dāng)濃度為5mg/ml、10mg/ml、25mg/ml柴胡注射液作用人肝癌細(xì)胞株HepG2 12小時(shí)后，G1期的細(xì)胞的百分比不斷減少，柴胡注射液為5mg/ml、10mg/ml、25mg/ml時(shí)，G1％分別為66.30％，57.27％，49.23％?？梢姴?/p>

5、胡注射液對(duì)人肝癌細(xì)胞株HepG2的阻滯主要在G1期。 2、柴胡注射液對(duì)體外肝癌細(xì)胞株HepG2凋亡的影響 2.1加入柴胡注射液12h后，與空白對(duì)照組相比，HepG2細(xì)胞形態(tài)發(fā)生顯著變化，倒置顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)細(xì)胞體積縮小，變圓，胞漿量減少，并隨著藥物濃度增加，貼壁細(xì)胞逐漸減少，懸浮細(xì)胞增多；而當(dāng)柴胡注射液實(shí)驗(yàn)組濃度達(dá)到25mg/ml時(shí)，其作用效果與氟尿嘧啶陽(yáng)性對(duì)照組幾乎相同。 2.2經(jīng)柴胡注射液作用后的HepG2細(xì)