青藤堿誘導人肝癌細胞HepG2凋亡機制的研究.pdf

1、目的： 采用不同濃度的青藤堿（sinomenine，SN）處理人肝癌細胞HepG2，從細胞形態(tài)結構及抑制率來研究青藤堿對人肝癌細胞HepG2的抑制作用。并通過檢測不同濃度青藤堿作用后survivin的變化，探討青藤堿誘導HepG2細胞survivin的表達與青藤堿介導HepG2細胞G2/M期阻滯的關系，以及survivin在青藤堿誘導HepG2細胞凋亡機制中的作用。 方法： 通過倒置顯微鏡觀察拍照，SRB實驗，A

2、O/EB，Hoechst熒光染色等技術檢測SN對人肝癌細胞HepG2的增殖抑制及誘導凋亡的作用。流式細胞術檢測細胞周期分布及凋亡率，相對定量RT-PCR測定survivinmRNA的表達、Western blot檢測細胞凋亡相關基因survivin的表達。 結果： SN能顯著抑制人肝癌細胞HepG2生長，并具有時間濃度依賴性。SN作用24h、48h、72h的半數抑制濃度（IC50）分別為1.44、1.21、0.39mM

3、。1.6 mM SN作用48h后，Hoechst熒光核染，人肝癌細胞HepG2核出現聚縮、片段化和周邊化，呈現典型的凋亡特征。FCM顯示細胞被阻滯于G2/M期，隨藥物濃度的增加，細胞凋亡率逐漸增加。相對定量RT-PCR結果顯示SN能下調HepG2細胞survivin mRNA的表達。Western blot檢測結果顯示青藤堿可以抑制HepG2細胞survivin的表達，并隨作用濃度的加大，Survivin的表達量減低；并發(fā)現Surviv

4、in在SN作用24h出現高表達。 結論： （1）SN具有對肝癌細胞的增殖抑制作用，并具有時間濃度依賴性。 （2）SN具有誘導肝癌細胞株HepG2細胞凋亡的作用，有時間濃度依賴性。 （3）SN使細胞增殖受阻于細胞周期G2/M期。 （4）survivin在SN誘導的細胞凋亡中發(fā)揮重要作用，隨著SN濃度的升高，Survivin蛋白的表達下調，引起細胞凋亡。 （5）SN抑制HepG2細胞survi