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文檔簡介
1、目的:有研究表明破骨細胞能夠產(chǎn)生活性氧族來促進骨的吸收。本課題將研究抗氧化劑番茄紅素是否可以通過抑制破骨細胞產(chǎn)生活性氧族來抑制其骨吸收功能,從而為骨質(zhì)疏松癥發(fā)病機理和防治提供一定的科學依據(jù)。 方法:用直接分離培養(yǎng)出生24小時內(nèi)的Wistar大鼠破骨細胞的方法培養(yǎng)破骨細胞。把這些細胞植入24孔細胞培養(yǎng)板(孔內(nèi)預置蓋玻片或骨片),隨機分為A、B、C、D、E五組,分別用含有不同濃度番茄紅素或維生素C的a-MEM培養(yǎng)基進行培養(yǎng)。每天在倒
2、置顯微鏡下觀察培養(yǎng)中的破骨細胞的形態(tài)并計數(shù)。分別在第2、4、6天取出部分細胞玻璃爬片,根據(jù)試劑盒說明進行TRAP染色。第6天將部分孔中的培養(yǎng)液吸出后分別進行細胞玻璃爬片或骨片的四唑氮藍染色。第7天取出骨片進行掃描電鏡照像。對掃描電鏡圖像用image-pro plus5.0圖像分析軟件分析骨吸收陷窩的數(shù)目和面積。 結果: (1)培養(yǎng)30分鐘后破骨細胞即可貼壁,整個培養(yǎng)過程中在倒置顯微鏡下觀察各組破骨細胞形態(tài)無明顯差異;各組
3、間相同時間的破骨細胞數(shù)差別無顯著性意義(P>0.05),各組內(nèi)不同時間破骨細胞計數(shù)結果差別也無顯著性意義(P>0.05)。 (2)TRAP染色陽性多核細胞鏡下胞漿酸性磷酸酶活性部位呈紫紅色,細胞核染色陰性或淡染,偽足清晰。各組不同時間點TRAP+細胞計數(shù)結果顯示:各組間相同時間點TRAP+細胞個數(shù)差別無顯著性意義(P>0.05),各組內(nèi)不同時間點TRAP+細胞個數(shù)差別也沒有顯著性意義(P>0.05)。 (3)四唑氮藍能被
4、活性氧族分解為紫色的甲月替,可作為反映細胞內(nèi)活性氧族水平的指標。四唑氮藍染色結果提示:10<'-5>mol/L的番茄紅素明顯抑制了破骨細胞產(chǎn)生ROS的能力。 (4)掃描電鏡結果顯示:破骨細胞在骨片上形成形態(tài)不一的骨陷凹,可見10<'-7>mol/L,的番茄紅素部分抑制了骨吸收陷凹面積的增加,而10<'-5>mol/L的番茄紅素則幾乎完全抑制了骨吸收陷凹的形成。image-pro plus5.0計算的各組骨吸收陷凹的平均面積顯示B
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