體外破骨細(xì)胞骨吸收模型的建立及骨吸收上清液對(duì)前成骨細(xì)胞功能的影響及其機(jī)制研究.pdf

1、目的：研究破骨細(xì)胞骨吸收活動(dòng)中的分泌產(chǎn)物對(duì)成骨細(xì)胞增殖、分化及成骨功能的影響，以了解活化的破骨細(xì)胞在體外對(duì)成骨細(xì)胞的影響；并確定其發(fā)生作用的信號(hào)通路，以期為治療牙槽骨吸收提供新的治療靶點(diǎn)。
　　 方法：誘導(dǎo)小鼠RAW264-7細(xì)胞為破骨細(xì)胞，用抗酒石酸酸性磷酸酶(Tartrateresistantacidphosphatase，TRAP)染色和破骨細(xì)胞特異性基因檢測(cè)鑒定。破骨細(xì)胞與牛骨磨片共培養(yǎng)，甲苯胺藍(lán)染色。收集共培養(yǎng)上清液作

2、用于小鼠MC3T3-El細(xì)胞，用甲基噻唑基四唑法(methylthiazolyltetrazolium，MTT)法、酶聯(lián)免疫吸附法、茜素紅染色及反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)細(xì)胞的增殖、骨鈣素水平、礦化及成骨特征基因的表達(dá)；共培養(yǎng)上清液及PI3K特異性抑制劑作用于小鼠MC3T3-El細(xì)胞后，蛋白免疫印跡實(shí)驗(yàn)(western-bolt)檢測(cè)相關(guān)信號(hào)蛋白的表達(dá)。
　　 結(jié)果：TRAP染色、破骨細(xì)胞特異性基因檢測(cè)及甲苯胺藍(lán)染色，表明RAW26

3、4-7細(xì)胞可分化為具骨吸收能力的破骨細(xì)胞。破骨細(xì)胞骨吸收上清液作用，MC3T3-El細(xì)胞增殖受抑制(OD值在0.062±0.004和0.405±0.033之間，P<0.05)。骨鈣素水平增高(第10日上清組的骨鈣素濃度為2.965±0.047μg/L)，鈣化結(jié)節(jié)增多，堿性磷酸酶(alkalinephosphatase，ALP)和Runt相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子2(runtrelatedtranscriptionfactor2，Runx2)的轉(zhuǎn)錄增強(qiáng)

4、。破骨細(xì)胞骨吸收上清作用后MC3T3-El細(xì)胞中PI3K的調(diào)節(jié)亞基P-P85及PI3K信號(hào)通路下游分子P-AKT表達(dá)顯著增加(P<0.05)。特異性抑制劑LY294002阻斷后，P-P85及P-AKT均出現(xiàn)了劑量依賴性的降低，且都低于上清處理組(P<0.05)。
　　 結(jié)論：RAW264-7破骨細(xì)胞骨吸收上清液具有抑制成骨樣細(xì)胞增殖，促進(jìn)分化和鈣化成骨的作用。破骨細(xì)胞骨吸收上清促進(jìn)小鼠MC3T3-El細(xì)胞的分化作用是通過PI3K