體外破骨細胞骨吸收模型的建立及骨吸收上清液對前成骨細胞功能的影響及其機制研究.pdf

1、目的：研究破骨細胞骨吸收活動中的分泌產(chǎn)物對成骨細胞增殖、分化及成骨功能的影響，以了解活化的破骨細胞在體外對成骨細胞的影響；并確定其發(fā)生作用的信號通路，以期為治療牙槽骨吸收提供新的治療靶點。
　　 方法：誘導小鼠RAW264-7細胞為破骨細胞，用抗酒石酸酸性磷酸酶(Tartrateresistantacidphosphatase，TRAP)染色和破骨細胞特異性基因檢測鑒定。破骨細胞與牛骨磨片共培養(yǎng)，甲苯胺藍染色。收集共培養(yǎng)上清液作

2、用于小鼠MC3T3-El細胞，用甲基噻唑基四唑法(methylthiazolyltetrazolium，MTT)法、酶聯(lián)免疫吸附法、茜素紅染色及反轉錄聚合酶鏈反應檢測細胞的增殖、骨鈣素水平、礦化及成骨特征基因的表達；共培養(yǎng)上清液及PI3K特異性抑制劑作用于小鼠MC3T3-El細胞后，蛋白免疫印跡實驗(western-bolt)檢測相關信號蛋白的表達。
　　 結果：TRAP染色、破骨細胞特異性基因檢測及甲苯胺藍染色，表明RAW26

3、4-7細胞可分化為具骨吸收能力的破骨細胞。破骨細胞骨吸收上清液作用，MC3T3-El細胞增殖受抑制(OD值在0.062±0.004和0.405±0.033之間，P<0.05)。骨鈣素水平增高(第10日上清組的骨鈣素濃度為2.965±0.047μg/L)，鈣化結節(jié)增多，堿性磷酸酶(alkalinephosphatase，ALP)和Runt相關轉錄因子2(runtrelatedtranscriptionfactor2，Runx2)的轉錄增強

4、。破骨細胞骨吸收上清作用后MC3T3-El細胞中PI3K的調節(jié)亞基P-P85及PI3K信號通路下游分子P-AKT表達顯著增加(P<0.05)。特異性抑制劑LY294002阻斷后，P-P85及P-AKT均出現(xiàn)了劑量依賴性的降低，且都低于上清處理組(P<0.05)。
　　 結論：RAW264-7破骨細胞骨吸收上清液具有抑制成骨樣細胞增殖，促進分化和鈣化成骨的作用。破骨細胞骨吸收上清促進小鼠MC3T3-El細胞的分化作用是通過PI3K