成骨細胞和破骨細胞的體外培養(yǎng)及氟對其的影響.pdf

1、本文通過細胞培養(yǎng)技術,研究氟對成骨細胞和破骨細胞形態(tài)結構,以及對成骨細胞體外增殖和礦化能力的影響.試驗采用24h內昆明乳鼠,拉頸處死,無菌取出頭蓋骨,在超凈工作臺內將其剪碎,先用0.25﹪胰蛋白酶37℃消化30min,然后用0.2﹪膠原酶37℃振蕩消化60min,反復吹打骨片分離更多細胞.用含15﹪胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液將細胞配成所需濃度進行接種.培養(yǎng)第二天換液,以后隔天換液.采用此法成功分離培養(yǎng)出了具有典型特征的成骨細胞.培養(yǎng)過程中

2、,成骨細胞表現出不同的體外生長時相(潛伏期、對數生長期、水平靜至期),剛接種的成骨細胞呈球形,4h后部分細胞貼壁展開,24h后細胞完全貼壁展開.第3d時,成骨細胞呈半匯合狀態(tài);5d時,細胞完全匯合;7d時,細胞重疊生長,呈鋪路石狀;9d時,成骨細胞密積生長;11d時,基質堆積,細胞結節(jié)形成;13d時,礦化結節(jié)形成.氟對成骨細胞形態(tài)結構、體外增殖能力的影響具有劑量-時間依賴性.大于10<'-4>mol/l的氟對成骨細胞具有明顯的細胞毒性作

3、用,10<'-1>mol/l和10<'-2>mol/l氟能致成骨細胞急性死亡.氟濃度小于10<'-4>mol/l時,對成骨細胞的毒性作用不明顯.10<'-5>mol/l~10<'-7>mol/l氟可促進成骨細胞的體外增殖,10<'-3>mol/l和10<'-4>mol/l氟對成骨細胞的體外增殖具有抑制作用.氟對成骨細胞礦化能力的影響具有劑量依賴性.經實驗觀察表明,10<'-5>mol/l~10<'-7>mol/l氟能促進成骨細胞的礦化能

4、力.另外,試驗采用2周齡的昆明小鼠,拉頸處死,在超凈工作臺內無菌分離長骨,剔除骨周組織和骨骺端.將分離骨骼置于冷DMEM培養(yǎng)液中,分成兩半,刮取骨髓,而后吹打骨碎片,使更多細胞脫落.待骨片沉淀后,將骨髓細胞接種,30min后收集未貼壁的細胞,重接種于成骨細胞上培養(yǎng),以后隔2d換液.用此法成功誘導培養(yǎng)出了具有多核、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)陽性的破骨細胞.氟對破骨細胞形態(tài)的影響呈劑量-時間依賴性.倒置相差顯微鏡下10<'-1>mol/