α-玉米赤霉醇對體外培養(yǎng)成骨細(xì)胞的影響及機制.pdf

1、目的：
　　 利用體外細(xì)胞培養(yǎng)的方法觀察|á-ZAL 對大鼠成骨細(xì)胞增殖、成骨細(xì)胞內(nèi)NO 含量以及成骨細(xì)胞內(nèi)c-jun基因的表達(dá)情況等，探討|á-ZAL 對大鼠成骨細(xì)胞的影響，為其應(yīng)用于絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥的治療提供理論依據(jù)。
　　 方法：
　　 取新生SD大鼠(24h)，斷頭處死后，用75％的酒精浸泡消毒10分鐘，酒精中取出大鼠，從頸部沿頭蓋骨剝離皮膚，取下頭蓋骨,剔凈、漂洗、剪碎。加入0.25％胰蛋白酶消化20m

2、in后，用PBS 洗滌；加入0.1％膠原酶放入CO2 培養(yǎng)箱中1h后，加細(xì)胞培養(yǎng)液，吹打均勻；實驗時將細(xì)胞以10 5個/m1的密度接種于培養(yǎng)板，置培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；待細(xì)胞貼壁，吸去培養(yǎng)液，換上新的培養(yǎng)液。將細(xì)胞分四組：正常組（加入正常培養(yǎng)液）、雌激素組（加入含雌激素10-10 mol/L 培養(yǎng)液）、10-7 mol/L |á-ZAL 濃度組和10-10mol/L |á-ZAL 濃度組，加入相應(yīng)藥物，然后在不同時間檢測以下指標(biāo)：
　　

3、 （1）流式細(xì)胞術(shù)檢測不同濃度|á-ZAL 對成骨細(xì)胞凋亡的影響。
　　 （2）試劑盒檢測各組成骨細(xì)胞內(nèi)NO 含量的變化。
　　 （3）免疫組化方法檢測各組成骨細(xì)胞內(nèi)c-jun基因的表達(dá)情況。
　　 結(jié)果：
　　 （1）雌激素組、|á-ZAL10-7 mol/L組和|á-ZAL10-10 mol/L組成骨細(xì)胞凋亡率均低于正常組，其中|á-ZAL 對成骨細(xì)胞的影響要低于雌激素。
　　 （2）各濃度|

4、á-ZAL 均使成骨細(xì)胞NO 含量明顯增加,24h 時隨|á-ZAL 濃度增加,NO含量也逐漸增加，10-10 mol/L 時升高作用明顯。48h 結(jié)果顯示：|á-ZAL10-7 mol/L和|á-ZAL10-10 mol/L 均能增加細(xì)胞中NO 含量，但|á-ZAL10-10 mol/L 對成骨細(xì)胞的影響要弱與|á-ZAL10-7 mol/L。
　　 （3）10-10 mol/L E2組，10-7 mol/L |á-ZAL 濃

5、度，10-10 mol/L |á-ZAL 濃度組較正常組在胞質(zhì)表達(dá)深，正常組表達(dá)較淺，說明10-7 mol/L |á-ZAL 濃度，10-10 mol/L |á-ZAL 濃度組可以通過c-jun 來抑制成骨細(xì)胞的凋亡。
　　 結(jié)論：
　　 （1）|á-ZAL能抑制成骨細(xì)胞的凋亡，促進其增殖。
　　 （2）|á-ZAL能調(diào)節(jié)成骨細(xì)胞內(nèi)NO 含量，可能與其對成骨細(xì)胞的調(diào)節(jié)作用有關(guān)。
　　 （3）|á-ZAL能