銀杏內(nèi)酯B，α-玉米赤霉醇對TNFα刺激內(nèi)皮細胞的保護作用及機制.pdf

1、活性氧(reactiveoxygenspecies，ROS)的過度產(chǎn)生或與其清除防御機制的失衡能夠?qū)е卵趸瘧?yīng)激，損害血管內(nèi)皮細胞的功能，甚至導致細胞凋亡或壞死。動脈粥樣硬化、高血壓等心血管疾病的許多致病因素/因子，如腫瘤壞死因子α(tumornecrosisfactor,TNFα)、血管緊張素Ⅱ等，都具有刺激內(nèi)皮細胞產(chǎn)生ROS的能力，并通過ROS激活細胞內(nèi)的信號轉(zhuǎn)導機制和基因表達，在疾病的發(fā)生發(fā)展過程中起關(guān)鍵作用；而抗氧化藥物能夠降低或

2、消除氧化應(yīng)激損傷，保護血管內(nèi)皮細胞的功能，對心血管疾病具有預(yù)防和治療的潛能。銀杏抽提物早就被用于中風等缺血性疾病的治療，有清除自由基、抗脂質(zhì)過氧化的作用，但對粥樣硬化血管內(nèi)皮功能的保護作用和機制了解較少[5]。植物雌激素α-玉米赤霉醇(α-zearalanol，α-ZAL)能明顯抑制切除卵巢家兔喂食高膽固醇后動脈粥樣斑塊的形成，并使其病理變化顯著減輕[19]，最近的研究顯示，它能改善ox-LDL刺激下的內(nèi)皮細胞功能[20]，但其作用機制

3、還很不清楚。 本研究觀察銀杏內(nèi)酯B(ginkgobiloba，GB)和α-ZAL對TNFα刺激的人臍靜脈內(nèi)皮細胞(humanumbilicalveinendothelialcells，HUVECs)功能的影響，探討其作用機制，為今后合理的臨床應(yīng)用提供依據(jù)。本研究主要進行了以下幾方面的工作：一.GB和α-ZAL對TNFα刺激內(nèi)皮細胞ROS產(chǎn)生的影響及機制 1.檢測GB和α-ZAL對TNFα刺激血管內(nèi)皮細胞ROS產(chǎn)生的影響。

4、 2.采用小分子RNA干擾(siRNA)技術(shù)消除HUVECs的NADPH氧化酶的p47phox亞基，觀察其對TNFα誘導血管內(nèi)皮細胞ROS產(chǎn)生的影響。觀察GB和α-ZAL對TNFα誘導HUVECsp47phoxmRNA和蛋白表達的影響。 二.GB和α-ZAL對TNFα刺激內(nèi)皮細胞ROS介導信號轉(zhuǎn)導通路的影響觀察GB和α-ZAL對TNFα誘導HUVECs中ERK的激活及轉(zhuǎn)錄因子thenuclearfactorkappaB(

5、NF-κB)、thespecificityprotein-1(SP-1)、theactivatorprotein1(AP-1)表達的影響。 三.GB和α-ZAL對TNFα刺激內(nèi)皮細胞HO-1基因表達的影響觀察ANDPH氧化酶來源的ROS及GB和α-ZAL對TNFα誘導血管內(nèi)皮細胞HO-1mRNA及蛋白表達的影響。 四.ROS及GB和α-ZAL對TNFα刺激內(nèi)皮細胞胞漿游離鈣水平的影響用激光共聚焦顯微鏡檢測胞漿游離鈣濃度。

6、為觀察ROS對TNFα刺激引起的胞漿游離鈣([Ca2+]i)的影響，采用siRNA技術(shù)消除HUVECs的NADPH氧化酶的p47phox亞基。觀察GB和α-ZAL對TNFα刺激引起的[Ca2+]i的影響。 結(jié)果顯示：1.GB和α-ZAL明顯抑制TNFα誘導的細胞內(nèi)ROS產(chǎn)生。用siRNA技術(shù)消除NADPH氧化酶的p47phox亞基完全阻斷TNFα誘導的細胞內(nèi)ROS產(chǎn)生。GB和α-ZAL明顯降低TNFα誘導的p47phoxmRNA

7、和蛋白的表達。 2.TNFα刺激明顯增加ERK2的磷酸化及轉(zhuǎn)錄因子NF-κB和SP-1的表達，對AP-1的表達無明顯影響。GB和α-ZAL預(yù)處理均明顯抑制TNFα誘導的NF-κB表達，完全阻斷TNFα誘導的SP-1的表達，對AP-1表達基本沒有影響。 3.GB和α-ZAL及轉(zhuǎn)染p47phoxsiRNA顯著抑制了TNFα誘導HUVECs中HO-1mRNA和蛋白的表達。 4.TNFα刺激使HUVECs胞漿游[Ca2+

8、]i明顯增加；轉(zhuǎn)染p47phoxsiRNA完全消除了TNFα刺激引起[Ca2+]i的增加；GB和α-ZAL明顯抑制了TNFα引起的[Ca2+]i的增加。 上述結(jié)果提示，GB和α-ZAL均能夠抑制內(nèi)皮細胞中TNFα誘導的ROS的產(chǎn)生及由ROS介導的信號轉(zhuǎn)導通路和基因表達。主要機制是通過抑制NADPH氧化酶。TNFα刺激內(nèi)皮細胞胞漿游離鈣的增加依賴ROS，可被GB和α-ZAL抑制。因此，GB和α-ZAL可能具有抗氧化應(yīng)激，保護血管內(nèi)