玉米赤霉烯酮對(duì)睪丸間質(zhì)細(xì)胞的毒性作用.pdf

1、玉米赤霉烯酮(ZEA)是由鐮刀菌等真菌產(chǎn)生的一種霉菌毒素，廣泛存在于動(dòng)物飼料和人類的食品中，具有生殖與發(fā)育毒性、免疫毒性，對(duì)腫瘤發(fā)生也有一定影響，對(duì)動(dòng)物的生產(chǎn)性能和人類的健康具有較大的潛在威脅。我國(guó)玉米赤霉烯酮污染嚴(yán)重，影響也越來(lái)越廣泛。近年來(lái)，玉米赤霉烯酮對(duì)雄性動(dòng)物生殖系統(tǒng)的危害越來(lái)越受到人們的重視。研究發(fā)現(xiàn)，玉米赤霉烯酮中毒可導(dǎo)致雄性動(dòng)物乳腺肥大并呈雌性化、包皮水腫，性欲減退、睪丸萎縮和精液數(shù)量減少且質(zhì)量降低。但到目前為止，人們對(duì)玉

2、米赤霉烯酮雄性生殖毒性仍缺乏全面的認(rèn)識(shí)，尤其是在分子水平的認(rèn)識(shí)遠(yuǎn)遠(yuǎn)不夠。為進(jìn)一步揭示玉米赤霉烯酮對(duì)雄性動(dòng)物的生殖毒性作用，本研究在建立睪丸間質(zhì)細(xì)胞(Leydigcell)毒性實(shí)驗(yàn)體外模型的基礎(chǔ)上，從細(xì)胞和分子水平對(duì)玉米赤霉烯酮的睪丸Leydig細(xì)胞毒性作用進(jìn)行了探討。
　　 本研究通過(guò)MTT法確定了ZEA對(duì)睪丸Leydig細(xì)胞的作用濃度;對(duì)原代培養(yǎng)的SD大鼠睪丸Leydig細(xì)胞加入10U/mlHCG，ZEA染毒，ELISA法測(cè)定

3、了ZEA對(duì)Leydig細(xì)胞睪酮分泌的影響作用;通過(guò)單細(xì)胞凝膠電泳法測(cè)定了ZEA對(duì)睪丸Leydig細(xì)胞DNA的損傷作用;通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定了ZEA對(duì)睪丸Leydig細(xì)胞凋亡率的影響以及利用Westernblot技術(shù)測(cè)定了ZEA對(duì)睪丸Leydig細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白Bax、Bcl-2表達(dá)量的影響。結(jié)果表明:①隨著ZEA劑量的增加，細(xì)胞相對(duì)活率降低，各劑量組之間均有顯著性差異(P＜0.05)，當(dāng)ZEA濃度為10μg/ml時(shí)，細(xì)胞相對(duì)存活率為54.

4、49％，接近半數(shù)致死濃度(LD50)，因此將實(shí)驗(yàn)的染毒濃度確定為1μg/ml、5μg/ml、10μg/ml和20μg/ml;②ZEA對(duì)睪酮的分泌有抑制作用，隨著染毒濃度的增加(0μg/ml、1μg/ml、10μg/ml、20μg/ml作用12h)和染毒時(shí)間的增長(zhǎng)(5μg/mlZEA分別作用0h、1h、6h、12h、24h)，睪丸Leydig細(xì)胞睪酮分泌量呈明顯的下降趨勢(shì)(P＜0.05);③ZEA對(duì)睪丸Leydig細(xì)胞具有DNA損傷作用，

5、細(xì)胞彗星率隨著染毒濃度的增加而增加，細(xì)胞拖尾長(zhǎng)度和尾部DNA含量也均呈現(xiàn)出上升趨勢(shì)，除ZEA1μg/ml組外，其余各劑量組與對(duì)照組均有顯著性差異(P＜0.05);④ZEA能夠誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，且細(xì)胞的凋亡率以及Bax/Bcl-2隨著染毒濃度的增加呈現(xiàn)出先上升后下降的趨勢(shì)，即ZEA低濃度時(shí)主要體現(xiàn)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，高濃度時(shí)主要導(dǎo)致細(xì)胞壞死，隨著染毒時(shí)間的延長(zhǎng)細(xì)胞凋亡率和Bax/Bcl-2均呈顯著的上升趨勢(shì)(P＜0.05)。表明ZEA暴露可降低睪丸