玉米赤霉烯酮抑制離體小鼠Leydig細(xì)胞睪酮分泌的機(jī)理研究.pdf

1、為揭示玉米赤霉烯酮(ZEA)抑制睪丸間質(zhì)細(xì)胞(Leydig cell)分泌睪酮的分子機(jī)理，實(shí)驗(yàn)分別從ZEA對(duì)小鼠Leydig細(xì)胞睪酮分泌的抑制作用，ZEA對(duì)睪酮合成通路中各因素的影響作用，ZEA對(duì)細(xì)胞線粒體的損傷作用，ZEA在小鼠Leydig細(xì)胞的作用位點(diǎn)四個(gè)方面進(jìn)行了探討。
　　實(shí)驗(yàn)以原代培養(yǎng)的小鼠Leydig細(xì)胞為材料，用ELISA法分別測(cè)定了在hCG環(huán)境或cAMP環(huán)境下ZEA暴露濃度為0，1，5，10，20μg/mL及暴露時(shí)

2、間為1，6，12，24h時(shí)睪酮的分泌量。用ELISA法分別測(cè)定了ZEA暴露濃度為0，1，5，10，20μg/mL及暴露時(shí)間為1，6，12，24h時(shí)胞漿內(nèi)cAMP水平（hCG環(huán)境）;用化學(xué)發(fā)光標(biāo)記免疫分析法(CLIA)測(cè)定其細(xì)胞表面的LH/hCG受體結(jié)合力;用Western Blot法分別測(cè)定了LH/hCG受體蛋白、雌激素受體蛋白的表達(dá)量及細(xì)胞內(nèi)類固醇激素合成酶在翻譯水平的表達(dá)量;用熒光定量PCR法測(cè)定了類固醇激素合成酶在轉(zhuǎn)錄水平的表達(dá)量

3、;通過流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定了其線粒體膜電位的變化。分別選取低濃度ZEA(5μg/mL)及高濃度ZEA（20μg/mL）暴露及短時(shí)間(6h)和長(zhǎng)時(shí)間(24h) ZEA暴露的小鼠Leydig細(xì)胞，用透射電子顯微鏡觀察了其內(nèi)部超微結(jié)構(gòu)，通過Western Blot法測(cè)定了細(xì)胞內(nèi)孤核受體Nur77的表達(dá)情況。
　　結(jié)果表明，hCG環(huán)境中高濃度及長(zhǎng)時(shí)間ZEA暴露對(duì)睪酮分泌的抑制效應(yīng)極顯著(P＜0.01)，而cAMP環(huán)境中，不同濃度及時(shí)間的ZEA暴

4、露均可顯著抑制Leydig細(xì)胞分泌睪酮(P＜0.05)，且濃度及時(shí)間-效應(yīng)關(guān)系明顯。不同濃度及時(shí)間的ZEA暴露對(duì)Leydig細(xì)胞LH/hCG受體的結(jié)合力及表達(dá)量的影響不顯著(P＞0.05)，而低濃度及長(zhǎng)時(shí)間ZEA暴露使胞漿內(nèi)cAMP水平顯著升高(P＜0.05)。不同濃度及不同時(shí)間的ZEA暴露，均可擾亂類固醇激素合成酶的活性，其中類固醇合成快速調(diào)節(jié)蛋白(StAR)的表達(dá)量隨著ZEA暴露濃度的增大而呈現(xiàn)顯著升高的趨勢(shì)(P＜0.05)，而不同

5、時(shí)間的ZEA暴露則對(duì)其表達(dá)量影響不顯著(P＞0.05);3β-羥甾脫氫酶(3β-HSD)的表達(dá)量則因不同的暴露時(shí)間而不同，且呈現(xiàn)先降低后升高又降低的趨勢(shì)。細(xì)胞色素P450膽固醇側(cè)鏈裂解酶(P450scc)、細(xì)胞色素P45017α-羥化酶(P450c17a)、17β-羥甾脫氫酶(17β-HSD)的表達(dá)量則因ZEA的暴露而有不同程度的降低，且與對(duì)照組相比差異顯著(P＜0.05)。不同濃度及不同時(shí)間的ZEA暴露均使小鼠Leydig細(xì)胞的線粒體

6、膜電位呈現(xiàn)下降的趨勢(shì)，且高濃度組（10，20μg/mL）及長(zhǎng)時(shí)間組(6，12，24h)與對(duì)照組相比差異顯著(P＜0.05)。不同濃度及時(shí)間的ZEA暴露對(duì)Leydig細(xì)胞雌激素受體的表達(dá)量影響不顯著(P＞0.05)。ZEA暴露可以破壞小鼠Leydig細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)，造成線粒體空泡化及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的損傷，且高濃度較低濃度損傷明顯，長(zhǎng)時(shí)間較短時(shí)間損傷明顯。低濃度及高濃度的ZEA暴露與短時(shí)間及長(zhǎng)時(shí)間的ZEA暴露都極顯著地抑制了Nur77的表達(dá)。