銀杏內(nèi)酯B對內(nèi)皮祖細胞氧化損傷的保護作用及機制研究.pdf

1、目的：
　　 觀察銀杏內(nèi)酯B對氧化低密度脂蛋白(Ox-LDL)誘導的人外周血內(nèi)皮祖細胞(EPCs)氧化損傷的影響，并探討其可能的作用機制。
　　 方法：
　　 采用密度梯度離心法分離出人外周血單個核細胞（MNC），以5×1006個/cM2密度接種細胞到事先包被纖維連接蛋白的24孔培養(yǎng)板中，每孔加入M199培養(yǎng)液1ml{包含有10％胎牛血清、青霉素(100U/ml)、鏈霉素(100U/ml)及VEGF(10ng/m

2、l)、bFGF(10ng/ml))。培養(yǎng)3天后，用培養(yǎng)液洗去未貼壁細胞，得到的貼壁細胞繼續(xù)原條件培養(yǎng)。培養(yǎng)至第6天，收集貼壁細胞用不含胎牛血清的M199培養(yǎng)液培養(yǎng)24h后，采用流式細胞術分析培養(yǎng)細胞CD34、VE-Cadherin、VEGFR-2、AC133的表達及Ⅷ因子相關抗原免疫組化來證實培養(yǎng)細胞的內(nèi)皮屬性，觀察培養(yǎng)細胞的形態(tài)特征以鑒定EPCs。將培養(yǎng)24h后的細胞隨機分成4組：正常對照組，氧化低密度脂蛋白損傷組(含0.05mg/m

3、lOx-LDL)、銀杏內(nèi)酯B0.05mg/ml保護組、銀杏內(nèi)酯B0.1mg/ml保護組。干預24h后，采用CCK8試劑盒測定觀察EPCs的活力；并取各組細胞裂解液用SOD、MDA試劑盒進行超氧化物歧化酶(SOD)活力、丙二醛(MDA)含量檢測。
　　 結(jié)果：
　　 培養(yǎng)3-7天后的人外周血單個核細胞呈典型的內(nèi)皮細胞樣集落。培養(yǎng)6d后流式細胞儀分析示CD34、VE-Cadherin、VEGFR-2及AC133陽性細胞比例分

4、別為65.09％±11.89％、44.69％±9.74％、30.46％±9.23％與19.68％±0.81％。CD34、VE-Cadherin雙陽性細胞比例為41.67％±10.18％，VEGFR-2、VE-Cadherin雙陽性細胞比例為28.19％±14.85％，CD34、AC133雙陽性細胞比例為18.67％±1.27％，VEGFR-2、AC133雙陽性細胞比例為15.10％±7.42％。培養(yǎng)兩周后，Ⅷ因子相關抗原免疫組化陽性，胞

5、質(zhì)呈棕色，空白對照及陰性對照不顯棕色。
　　 人外周血內(nèi)皮祖細胞與Ox-LDL共同孵育24h后，細胞CCK8試劑盒OD值明顯低于正常組(P＜0.01)，與Ox-LDL損傷組比較，銀杏內(nèi)酯B保護各組的細胞存活率顯著升高（P＜0.01）。
　　 與正常組比較，Ox-LDL損傷組的細胞裂解液SOD活力（U/ml）明顯降低（P＜0.01），MDA含量(nmol/ml)明顯升高(P＜0.01)，在銀杏內(nèi)酯B不同濃度與Ox-LDL共

6、同干預24h后，與單純Ox-LDL損傷組比較，細胞裂解液SOD活力明顯增高（P＜0.01），呈明顯的劑量依賴性（P＜0.01）。同時銀杏內(nèi)酯B保護各組的細胞裂解液MDA含量較Ox-LDL組明顯降低（P＜0.01）。
　　 結(jié)論：
　　 0.05mg/ml濃度的Ox-LDL能誘導人外周血內(nèi)皮祖細胞損傷，其機制可能與氧化損傷有關。
　　 銀杏內(nèi)酯B對Ox-LDL誘導的EPCs氧化損傷具有保護作用，其作用機制可能與提高