異煙肼和利福平對(duì)體外培養(yǎng)成骨細(xì)胞影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的： 研究異煙肼(Isoniazid，INH)和利福平(Rifampicin，RFP)對(duì)大鼠成骨細(xì)胞(osteoblast，OB)增殖、堿性磷酸酶(Alkalinephosphatase，ALP)活性和礦化能力的影響。 方法： 一、體外大鼠OB的分離及原代培養(yǎng) 取新生SD大鼠顱骨，采用多次酶消化法分離OB，進(jìn)行原代培養(yǎng)；通過(guò)相差顯微鏡下形態(tài)學(xué)觀察、Gomori氏鈣鈷法ALP染色、茜素紅鈣結(jié)節(jié)染色對(duì)OB進(jìn)

2、行鑒定：MTT法測(cè)定細(xì)胞增殖，繪制生長(zhǎng)曲線。 二、利福平和異煙肼對(duì)成骨細(xì)胞影響的研究 采用2-4繼代OB進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。(1)劑量分組：實(shí)驗(yàn)分為對(duì)照組(不加藥物)，INH各濃度組(100、80、50、25、10ug/ml)，RFP各濃度組(100、10、5、2.5、1ug/ml)，INH+RFP組(濃度分別為50ug/ml和2.5ug/ml)。(2)利福平和異煙肼對(duì)OB增殖影響：待細(xì)胞貼壁后，換加藥培養(yǎng)基，作用72h后測(cè)定細(xì)胞

3、MTT(OD)(3)利福平和異煙肼對(duì)成骨細(xì)胞ALP活性的影響：待細(xì)胞貼壁后，換加藥培養(yǎng)基，作用72h后測(cè)定細(xì)胞內(nèi)ALP活性和蛋白含量(4)利福平和異煙肼對(duì)OB礦化能力的影響：待細(xì)胞貼壁后，換加藥培養(yǎng)基，培養(yǎng)18天，茜素紅染色，鏡下計(jì)數(shù)各組礦化結(jié)節(jié)。 結(jié)果： 一、體外大鼠OB的分離及原代培養(yǎng) 分離所得的細(xì)胞具有典型的OB形態(tài)學(xué)特征，ALP改良Gomori氏鈣鈷法細(xì)胞化學(xué)染色大部分細(xì)胞胞漿可見棕褐色陽(yáng)性顆粒，并可在體

4、外形成礦化結(jié)節(jié)，茜素紅細(xì)胞化學(xué)染色法呈現(xiàn)紅色反應(yīng)，鑒定為OB，且純度較高，功能活躍。生長(zhǎng)增殖情況可分為潛伏期、對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期、平臺(tái)期及衰退期，符合細(xì)胞的生長(zhǎng)規(guī)律。 二、利福平和異煙肼對(duì)成骨細(xì)胞影響的研究 (1)INH對(duì)OB的影響：與對(duì)照組比較，INH各濃度組對(duì)大鼠OB的增殖無(wú)明顯抑制作用，在50ug/ml及以下濃度時(shí)大鼠OB的ALP活性和礦化能力無(wú)明顯下降，80ug/ml及以上濃度時(shí)即有顯著下降(P＜0.05)：(2)利福平

5、對(duì)OB的影響：RFP在5ug/ml及以上濃度時(shí)即抑制大鼠OB的增殖、使ALP活性及礦化能力顯著降低(P＜0.05)，在2.5ug/ml及以下濃度時(shí)對(duì)大鼠OB的增殖、ALP活性和礦化能力無(wú)明顯影響(3)INH+RFP對(duì)OB的影響：當(dāng)INH和RFP(濃度各為50ug/ml和2.5ug/ml)聯(lián)合應(yīng)用時(shí)，在MTT(OD)值、ALP活性及礦化結(jié)節(jié)計(jì)數(shù)上與對(duì)照組相比均無(wú)顯著性差異，P＞0.05。 結(jié)論： 一、INH各濃度組對(duì)大鼠O

6、B的增殖無(wú)明顯抑制作用，在50ug/ml及以下濃度時(shí)大鼠OB的ALP活性和礦化能力無(wú)明顯下降，80ug/ml及以上濃度時(shí)即有顯著下降(P＜0.05)； 二、RFP在5ug/ml及以上濃度時(shí)即抑制大鼠OB的增殖、使ALP活性及礦化能力顯著下降(P＜0.05)，在2.5ug/ml及以下濃度時(shí)對(duì)大鼠OB的增殖、ALP活性和礦化能力均無(wú)明顯影響； 三、當(dāng)INH+RFP(濃度各為50ug/ml和2.5ug/ml)聯(lián)合應(yīng)用時(shí)對(duì)大鼠O