人bFGF的克隆及其對HeLa細胞生長和血管生成素表達的影響.pdf

1、宮頸癌是世界女性第二大惡性腫瘤。已經(jīng)有實驗證實血管新生與宮頸癌患者預后不良有關。有多個血管生成因子參與腫瘤血管發(fā)生過程，其中主要的有VEGF、bFGF和血管生成素。 bFGF是可以與肝素結合的多功能多肽家族的成員之一。它具有促血管生成的作用，它也在多種腫瘤的增殖和分化中發(fā)揮重要作用。研究發(fā)現(xiàn)多種惡性腫瘤都高表達bFGF。有學者研究顯示宮頸癌患者的血清中bFGF含量增高。血管生成素是唯一一個以促血管發(fā)生的功能而命名的血管生成因子

2、。血管生成素在內皮細胞可以發(fā)生核轉移，進而促進內皮細胞的增殖。血管生成素在HeLa細胞中也有核轉移現(xiàn)象，并且能夠在細胞核內促進rRNA的合成。 目前對于bFGF和血管生成素的研究主要集中在其如何誘發(fā)腫瘤的血管發(fā)生，進而促進腫瘤的進一步生長和惡化，以及它們在腫瘤預后評價中的相關作用。而對于二者的關系的研究比較少。有學者發(fā)現(xiàn)，應用血管生成素的反義核苷酸可以抑制體外培養(yǎng)的HeLa細胞和體內的腫瘤細胞的生長，但是細胞和腫瘤內的bFGF表

3、達增加。本實驗室前期的研究發(fā)現(xiàn)，在轉染血管生成素反義核苷酸的黑色素瘤細胞中，bFGF的表達增加，而在轉染血管生成素正義核苷酸的黑色素瘤細胞中，bFGF的表達降低。為了進一步的研究bFGF與血管生成素的關系，我們克隆了人bFGF基因，并且構建了含有人bFGF基因的正義和反義的真核表達載體，建立了穩(wěn)定表達bFGF的細胞株。進而探討在HeLa細胞中，利用bFGF基因的轉染改變細胞內源的bFGF基因的表達水平對血管生成素表達的影響。實驗結果顯示

4、，在轉染反義bFGF基因的bFGF低表達細胞株中，細胞表達的bFGF的mRNA和蛋白都降低，細胞的增殖受到了抑制，但是血管生成素的蛋白表達水平卻提高了。相反，在轉染正義bFGF基因的bFGF高表達的細胞株中，細胞表達的bFGF的mRNA和蛋白均增加，同時細胞的增殖增加，然而血管生成素的的蛋白表達水平下降了。但是，高表達和低表達bFGF的細胞的血管生成素的mRNA水平無顯著性差異。對HeLa細胞及高表達bFGF和低表達bFGF的細胞，施加