TL1A促進(jìn)活性氧生成介導(dǎo)高糖所致血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡.pdf

1、研究背景:高糖誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞凋亡是糖尿病血管病變的重要環(huán)節(jié),但其機(jī)制尚未闡明,普遍認(rèn)為,高糖誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞凋亡與活性氧(ROS)生成過量、清除減少,導(dǎo)致氧化應(yīng)激有關(guān)。我們最近的工作得出,高糖條件下,人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞TL1A表達(dá)明顯增多。TL1A作為一種新近發(fā)現(xiàn)的促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的細(xì)胞因子,是否通過ROS誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,目前國內(nèi)外未見相關(guān)報(bào)道。
　　目的:觀察TL1A對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞活性氧生成的影響,探討TL1A在高糖誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡中的作

2、用及其機(jī)制。
　　方法:1.以不同濃度(5.6mM,11.2 mM,22.4 mM,33.6 mM)葡萄糖孵育人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞24h,或以22.4 mM葡萄糖培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞不同時(shí)間(0h,6h,12h,24h,48h),Western bloting檢測各組內(nèi)皮細(xì)胞TL1A蛋白的表達(dá)。
　　2.將孵育的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞分為正常對(duì)照組、正常糖+TL1A組、高糖對(duì)照組、高糖+SOD+CAT組、高糖+TL1A抗體1μg/ml

3、組、高糖+TL1A抗體3μg/ml組、高糖+TL1A抗體9μg/ml組和高滲對(duì)照組。DCFH-DA染色法觀察活性氧生成較多的細(xì)胞數(shù),并采用流式細(xì)胞術(shù)檢測人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞 ROS生成量; Annexin V/PI熒光雙染色、流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡率;酶標(biāo)法檢測caspase-3的活性。
　　結(jié)果:高糖條件下,人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞TL1A蛋白表達(dá)顯著增高(P<0.01),且呈時(shí)間和濃度依賴性。與正常對(duì)照組相比,高糖組人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞ROS

4、生成量明顯增加,76.96±6.61vs46.80±4.10(P<0.01),正常糖+TL1A組ROS生成量達(dá)93.75±9.12,為正常對(duì)照組的2倍,也顯著高于高糖對(duì)照組(P<0.01),高糖培養(yǎng)液中加入TL1A抗體,ROS生成量呈劑量依賴性減少,高糖+TL1A抗體9μg/ml組內(nèi)皮細(xì)胞ROS生成量與高糖+SOD+CAT組和正常對(duì)照組相近;染色法檢測 HUVECs活性氧生成較多的細(xì)胞數(shù)結(jié)果與前述變化趨勢一致。正常對(duì)照組細(xì)胞凋亡率為4.

5、09％±0.39%,高糖對(duì)照組細(xì)胞凋亡率為23.70%±3.20%(P<0.01);正常糖+TL1A組細(xì)胞凋亡率達(dá)正常對(duì)照組的8.6倍,為高糖對(duì)照組的1.5倍(P<0.01);TL1A抗體呈劑量依賴性減少血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡率,其中高糖+TL1A抗體9μg/ml組細(xì)胞凋亡率與高糖+SOD+CAT組和正常對(duì)照組相近;高滲透壓不引起細(xì)胞凋亡。Caspase-3活性變化趨勢與細(xì)胞凋亡率變化結(jié)果相近。
　　結(jié)論:高糖上調(diào)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞TL1