慢病毒介導(dǎo)的ShRNA干擾CXCR4對卵巢癌細(xì)胞侵襲能力的影響.pdf

1、卵巢癌是當(dāng)前女性發(fā)病率較高的惡性腫瘤，現(xiàn)階段的研究仍不能明確其病發(fā)原因，且卵巢內(nèi)分泌功能以及組織解剖較復(fù)雜，初期癥狀不易察覺，就診時間晚，發(fā)生大面積的擴(kuò)散轉(zhuǎn)移的患者占多數(shù)；目前對卵巢癌的治療多采用腫瘤減滅手術(shù)及鉑類聯(lián)合化療，但由于手術(shù)很難完全清除病灶，化療也易產(chǎn)生耐藥性，以至于卵巢癌的預(yù)后極差，死亡率居于婦科腫瘤之首，因此，探尋卵巢癌新的治療方式已成為當(dāng)前研究的熱門。趨化因子受體CXCR4屬于7次跨膜的G蛋白偶聯(lián)受體家族，與其特異性配體

2、SDF-1構(gòu)成SDF-1/CXCR4生物軸，并參與多種反應(yīng)。關(guān)于乳腺癌的研究顯示，CXCR4具有很強(qiáng)的侵襲和促血管生成能力，與惡性腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。有研究證明，在卵巢癌中，采用免疫組化方法檢測CXCR4，得出正常上皮組織中CXCR4表達(dá)呈陰性，在癌組織及腹水中成陽性表達(dá)。
　　目的：旨在采用RNA干擾技術(shù)，抑制卵巢癌細(xì)胞株中CXCR4的表達(dá)，RT-PCR、Western blotting檢測抑制CXCR4后細(xì)胞株中CXCR4

3、的表達(dá)；Tramswell細(xì)胞小室檢測干擾CXCR4后細(xì)胞株的侵襲能力，從而了解CXCR4對于卵巢癌的轉(zhuǎn)移、侵襲能力的影響，并為卵巢癌的治療找到一個新的靶點(diǎn)。
　　方法：選用在線設(shè)計軟件設(shè)計短發(fā)夾RNA(shRNA),同源性檢索準(zhǔn)確后進(jìn)行合成,酶切，連入帶有綠色熒光的慢病毒載體，挑取陽性質(zhì)粒送交陽性克隆測序鑒定后,測序，轉(zhuǎn)染卵巢癌細(xì)胞株SKOV3，利用RT-PCR和Western blotting檢測細(xì)胞株中CXCR4的表達(dá)，Tr

4、answell小室檢測干擾CXCR4表達(dá)后細(xì)胞株中CXCR4的表達(dá)及細(xì)胞的侵襲力。
　　結(jié)果：成功構(gòu)建特異性干擾載體pLVshRNA‐EGFP-PuroCXCR4，轉(zhuǎn)染卵巢癌細(xì)胞SKOV3后,通過RT-PCR及Western blotting檢測CXCR4 mRNA及CXCR4蛋白的表達(dá)，結(jié)果顯示:CXCR4-shRNA組的CXCR4 mRNA及蛋白表達(dá)量明顯對照組及陰性組,具有顯著性差異(P<0.05)，Transwell細(xì)胞侵

5、襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:慢病毒載體轉(zhuǎn)染卵巢癌細(xì)胞株24h后，對照組、陰性組和實(shí)驗(yàn)組三組穿膜的細(xì)胞數(shù)量分別為和54.018±2.368、57.133±3.214和22.184±2.185，陰性組的抑制率為-5.78％（P＞0.05），實(shí)驗(yàn)組的抑制率為58.94%（P＜0.01）具有顯著性差別，而空白組與對照組相比數(shù)值沒有明顯的減少，無顯著性差異(P＞0.05)。
　　結(jié)論：特異性干擾慢病毒載體轉(zhuǎn)染卵巢癌細(xì)胞可以降低卵巢癌細(xì)胞SKOV3中CX