慢病毒RNA干擾GPR78對腎癌細胞增殖和侵襲力的影響.pdf

1、腎細胞癌（RCC）又簡稱腎癌，起源于腎實質腎小管上皮細胞，是泌尿生殖系統(tǒng)中最為常見惡性腫瘤之一，在腎癌中最常見病理類型為腎透明細胞癌（CRCC）。CRCC治療以根治性切除術（RN）為主，由于早期臨床癥狀不明顯，臨床上以晚期患者為多。并且部分腎癌患者存在術后腫瘤復發(fā)或轉移以及多耐藥性，對放、化療治療不敏感，療效不佳。免疫治療由于長期療效尚不能確定和總緩解率不高限制其廣泛推廣。因此深入研究腎細胞癌的增殖和侵襲的分子機制對提高早期診斷率和后續(xù)

2、治療療效十分關鍵。葡萄糖調節(jié)蛋白78(GRP78)是GRP家族中的重要成員，與熱休克蛋白(HSP70)具有較高的同源性,屬于 HSP70家族成員之一。GRP78在腫瘤細胞株和腫瘤組織如肝癌、結腸癌及肺癌、神經(jīng)膠質細胞瘤等高表達，并可能與腫瘤的凋亡、耐藥密切相關。但GRP78在腎細胞癌中的癌細胞增殖和侵襲等方面所起的作用尚未清楚。本研究分為兩個部分：
　　第一部分：慢病毒RNA干擾GRP78基因載體的構建及篩選。
　　目的：探

3、討慢病毒RNA干擾GPR78基因載體的構建及篩選。
　　方法：構建慢病毒靶向siRNA-GPR78干擾載體并轉染進入腎癌786-0細胞株。轉染48h后利用Realtime-PCR和Western blot分別檢測GRP78mRNA和蛋白表達。篩選出一條抑制率最高的siRNA-GPR78進入下一步研究。
　　結果：Realtime-PCR結果顯示與空白對照組(1.85±0.08)和陰性對照組(1.79±0.15)比較，GRP7

4、8mRNA的表達水平在siRNA1(0.32±0.09)、siRNA2(0.83±0.07)以及siRNA3組(0.79±0.11)均降低，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)；Western blot結果顯示與空白對照組(1±0.03)或陰性對照組(1±0.07)比較，GRP78蛋白表達水平在siRNA1組(0.21±0.03)、siRNA2組(0.79±0.03)以及siRNA3組(0.86±0.04)均降低，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.

5、01)；空白對照組與陰性對照組的GRP78mRNA和蛋白的表達水平差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。siRNA1抑制GRP78蛋白效率最佳。
　　結論：構建成功的siRNA-GRP78慢病毒載體可有效抑制腎癌786-0細胞中的GRP78基因及蛋白表達，以siRNA1抑制GRP78蛋白效率最佳，選擇siRNA1進下一步研究。
　　第二部分：RNA干擾GRP78基因對腎癌細胞增殖和侵襲力的影響。
　　目的：探討RNA干擾G

6、PR78基因后對腎癌細胞的增殖和侵襲能力的影響。
　　方法：將siRNA1-GRP78干擾載體轉染進入腎癌786-0細胞中。利用MTT法和Transwell法分別檢測出腎癌細胞的增殖和侵襲力。
　　結果：MTT法檢測結果顯示與空白對照組和陰性對照組相比，siRNA1組腎癌細胞生長抑制明顯，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。Transwell法檢測結果顯示與空白對照組和陰性對照組相比，siRNA1組腎癌細胞生長抑制明顯，差異有