RNA干擾β-catenin對小鼠垂體生長激素腺瘤細胞增殖和侵襲影響的研究.pdf

1、【背景】垂體腺瘤是鞍區(qū)常見腫瘤，為顱內(nèi)好發(fā)腫瘤之一，其發(fā)生率僅次于腦膠質細胞瘤和腦膜瘤。按照腫瘤生物學行為，垂體腺瘤分三類，即非侵襲性垂體腺瘤、侵襲性垂體腺瘤和垂體癌。其中，侵襲性垂體腺瘤的診斷及治療相對棘手，腫瘤常常侵犯周圍結構如海綿竇、蝶篩竇、上斜坡、鞍底骨質、硬腦膜等，且易發(fā)生垂體腺瘤卒中致病情危急。在治療上，侵襲性垂體腺瘤生長迅速，手術全切困難，術后殘留率和復發(fā)率高，對化放療不敏感，預后較差，是臨床工作中極大的難題。垂體腺瘤的侵

2、襲進展是一個多步驟、多環(huán)節(jié)的復雜過程，涉及多基因、多蛋白、多因素共同調控。目前對其具體機制尚不明確，有待進一步研究。
　　β-鏈蛋白（β-catenin）是一種相對保守的多功能細胞骨架蛋白，對于細胞生長及穩(wěn)態(tài)極為重要，常表達于細胞膜連接、游離細胞質、細胞核等亞細胞區(qū)域，與鈣粘蛋白E-cadherin構成重要的粘附結構，調節(jié)細胞粘附性。異常表達的β-catenin參與腫瘤侵襲遷移。研究發(fā)現(xiàn)，Wnt4信號轉導通路在垂體腺瘤的發(fā)生和發(fā)展

3、中起重要作用，β-catenin作為Wnt4信號轉導通路中關鍵下游蛋白，在垂體腺瘤中表達明顯升高，且其表達水平與腫瘤侵襲性明顯相關。
　　【目的】探討敲低β-catenin對小鼠垂體生長激素腺瘤GT1.1細胞增殖及侵襲能力的影響及其相關機理。
　　【方法】本研究采用脂質體轉染法，將β-catenin shRNA轉染小鼠垂體生長激素腺瘤GT1.1細胞，下調β-catenin在細胞中的表達，構建小鼠垂體生長激素腺瘤GT1.1細胞

4、β-catenin體外敲低模型。同時設置control shRNA質粒轉染對照組及未處理對照組。使用CCK-8法檢測β-catenin基因敲低后小鼠垂體生長激素腺瘤GT1.1細胞的增殖力改變，Transwell法檢測β-catenin基因敲低后小鼠垂體生長激素腺瘤GT1.1細胞的侵襲力改變。實時定量聚合酶鏈反應（RT-PCR）檢測各組細胞β-catenin、MMP2、MMP9的mRNA表達水平改變。蛋白免疫印跡（Western blot

5、）檢測各組細胞β-catenin、AKT、STAT3、CyclinD1、CDK4蛋白表達改變。通過明膠酶譜法檢測各組細胞胞內(nèi)MMP2和MMP9蛋白表達以及細胞外分泌的MMP2和MMP9蛋白變化。
　　【結果】轉染β-catenin shRNA可明顯降低小鼠垂體生長激素腺瘤GT1.1細胞的β-catenin mRNA和蛋白表達水平。敲低小鼠垂體生長激素腺瘤GT1.1細胞β-catenin基因，可抑制腫瘤細胞增殖和侵襲能力，并且β-c

6、atenin基因敲低后小鼠垂體生長激素腺瘤GT1.1細胞的CDK4、CyclinD1、AKT、STAT3蛋白表達明顯降低，細胞表達和分泌MMP2和MMP9蛋白明顯下降。
　　【結論】通過轉染β-catenin shRNA，敲低小鼠垂體生長激素腺瘤GT1.1細胞β-catenin基因，可明顯抑制β-catenin以及其下游基因AKT、STAT3、CyclinD1、CDK4、MMP2及MMP9蛋白表達，從而明顯抑制小鼠垂體腺瘤GT1.