靶向COX-2的RNA干擾對人大腸癌細(xì)胞增殖和侵襲的實驗研究.pdf

1、本研究分為二部分： 實驗一:靶向COX-2的RNA干擾對人大腸癌細(xì)胞增殖的影響 目的：觀察瞬時轉(zhuǎn)染特異性siRNA后對人大腸癌細(xì)胞HT-29 COX-2的表達(dá)，探討RNA干擾COX-2對大腸癌細(xì)胞增殖和凋亡的影響。 方法：以人大腸癌細(xì)胞系HT-29為研究對象，培養(yǎng)后瞬時轉(zhuǎn)染特異性siRNA，72小時后用MTT法檢測siRNA組、陰性對照組與空白對照組細(xì)胞的增殖活性，流式細(xì)胞儀分析三組細(xì)胞周期分布與凋亡的變化，RT

2、-PCR檢測三組細(xì)胞COX-2 mRNA表達(dá)水平，ELISA測定三組細(xì)胞培養(yǎng)液上清PGE2濃度。 結(jié)果：siRNA組與兩對照組相比細(xì)胞增殖活性明顯受抑制(P<0.01)；細(xì)胞生長明顯減緩,G0-G1期細(xì)胞比例增加(P<0.01)，S期、G2-M期細(xì)胞減少(P<0.01)，可見明顯的凋亡(P<0.01)；siRNA組較空白對照組COX-2 mRNA水平下降了76．90％(P<0.01)；培養(yǎng)液上清PGE2濃度下降了57.50％(P

3、<0.01)；陰性對照組與空白對照組之間差異無顯著性(P>0.05)。 結(jié)論： (1)國內(nèi)首次采用靶向COX-2的RNAi技術(shù)研究沉默COX-2基因?qū)Υ竽c癌細(xì)胞增殖的影響； (2)沉默COX-2基因可有效地抑制大腸癌細(xì)胞增殖，使癌細(xì)胞阻滯于G0-G1期并誘導(dǎo)其凋亡； (3)沉默COX-2基因可望成為大腸癌治療的新方法。 實驗二:靶向COX-2的RNA干擾對人大腸癌細(xì)胞侵襲的影響 目的：探討

4、RNA干擾COX-2對大腸癌侵襲的影響。 方法：以人大腸癌細(xì)胞株HT-29為研究對象，培養(yǎng)后瞬時轉(zhuǎn)染特異性的siRNA，轉(zhuǎn)染48小時后用RT-PCR檢測siRNA．組、陰性對照組與空白對照組MMP-2mRNA表達(dá)水平，免疫組化法檢測三組MMP-2的蛋白表達(dá)，Boyden體外侵襲實驗進(jìn)行癌細(xì)胞體外侵襲力分析。 結(jié)果： siRNA組與兩對照組相比對大腸癌細(xì)胞MMP-2 mRNA有明顯的抑制作用，MMP-2蛋白表達(dá)顯著下降(P

5、<0.01)；侵襲實驗siRNA組較空白對照組侵襲力下降了54.16％，兩者有顯著性差異(P<0.01)，而兩對照組之間差異無顯著性(P>0.05)。 結(jié)論： (1)國內(nèi)首次采用靶向COX-2的RNA干擾技術(shù)研究沉默COX-2基因?qū)Υ竽c癌細(xì)胞侵襲能力的影響； (2)沉默大腸癌COX-2基因可有效地抑制MMP-2mRNA表達(dá)，MMP-2蛋白水平下降，腫瘤細(xì)胞侵襲能力明顯降低； (3)沉默COX-2基因抑制大