PARG對人大腸癌Lovo細胞侵襲的影響及其機制探討.pdf

1、目的：探討聚(腺苷二磷酸核糖)水解酶[Voly(ADP-ribose)glycohydrolase,PARG]對人大腸癌Lovo細胞侵襲能力的影響及其機制。
　　 方法：采用攜帶PARG-shRNA的慢病毒載體穩(wěn)定沉默Lovo細胞PARG,并以LY294002(LY)作為Akt通路的抑制劑,用細胞-基質(zhì)黏附、侵襲及遷移試驗,觀察PARG基因沉默對Lovo細胞基質(zhì)黏附、侵襲和遷移能力的影響；RT-PCR檢測聚(腺苷二磷酸核糖)聚合

2、酶[poly(ADP-ribose)polymerase,PARP]mRNA的變化,并用western blot檢測Lovo細胞PARP、NF-κB、Akt磷酸化、MMP-2和MMP-9的蛋白表達。
　　 結果：⑴獲得了穩(wěn)定的PARG基因沉默Lovo細胞株。細胞基質(zhì)黏附實驗顯示,PARG-shRNA組Lovo細胞與纖維連接蛋白的黏附率較對照組(包括空白對照和空載體對照)明顯降低(P<0.05),黏附抑制率為25.22％；tran

3、swell侵襲實驗顯示,PARG-shRNA組Lovo細胞侵襲到達膜下表面的細胞數(shù)較對照組明顯減少(均P<0.05),侵襲抑制率為38.71％；transwell遷移實驗結果顯示,PARG-shRNA組Lovo細胞遷移穿過微孔膜的細胞數(shù)較對照組明顯減少(均P<0.05),遷移抑制率為35.29％；而PARG-shRNA+LY組Lovo細胞與纖維連接蛋白的黏附率和侵襲遷移到膜下的細胞數(shù)較對照組均無明顯變化(均P>0.05)。⑵RT-PCR

4、結果顯示,PARG-shRNA組Lovo細胞PARP mRNA表達與對照組比較有明顯減弱,差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。⑶western blot結果顯示,PARG-shRNA組Lovo細胞PARP、NF-κB、MMP-2和MMP-9的蛋白表達較對照組有明顯減弱:PI-Akt473蛋白表達較對照組有明顯增強,差異均具有統(tǒng)計學意義(PARP P<0.05、NF-κB P<0.01、MMP-2 P<0.05、MMP-9 P<0.05、

5、PI-Akt473P<0.05):而PARG-shRNA+LY組Lovo細胞NF-κB、MMP-2和MMP-9的蛋白表達與對照組比較均無明顯變化(均P>0.05)。
　　 結論：①PARG抑制可以降低Lovo細胞基質(zhì)黏附、侵襲和遷移能力,PARG在大腸癌侵襲中可能發(fā)揮重要作用。②PARG抑制可以同步降低Lovo細胞PARP、NF-κB、MMP-2和MMP-9的表達,并增強Akt的磷酸化,同時Akt磷酸化的抑制可以阻止由于PARG