人大腸癌LOVO細胞株組蛋白單ADP核糖基化對HUVECs增殖和遷移的影響及其機制的研究.pdf

1、目的：探討人大腸癌LOVO細胞株組蛋白單腺苷二磷酸核糖基化對HUVECs增殖和遷移的影響和可能機制。
　　方法：1.通過組蛋白精氨酸單ADP核糖基化位點突變?yōu)楸彼峄蛸嚢彼針?gòu)建慢病毒并轉(zhuǎn)染LOVO細胞。篩選出穩(wěn)定突變的LOVO細胞株作為實驗組，空載體對照組為轉(zhuǎn)染慢病毒空載體的LOVO細胞株，空白對照組為未作處理的LOVO細胞株。2.將各組LOVO細胞培養(yǎng)上清液分別加入到 HUVECs培養(yǎng)液中，通過 CCK-8細胞增殖實驗檢測LOV

2、O細胞組蛋白單ADP核糖基化減少對HUVECs細胞增殖能力的影響；同時，通過Transwell細胞遷移實驗觀察LOVO細胞組蛋白單ADP核糖基化減少對 HUVECs遷移能力的影響。3.通過 qRT-PCR檢測組蛋白單ADP核糖基化減少后LOVO細胞PTEN mRNA表達變化，同時通過 western blotting檢測H3K4me3、PTEN、PI3K、Akt、p-Akt、HIF-1α和VEGF蛋白表達變化。
　　結(jié)果：1. T

3、ranswell遷移實驗結(jié)果顯示實驗組HUVECs遷移穿過微孔膜的細胞數(shù)較空載體和空白對照組明顯減少（P＜0.05），其遷移抑制率為74.6％；增殖實驗結(jié)果顯示實驗組HUVECs增殖數(shù)比空載體和空白對照組明顯減少（P＜0.05），且隨著LOVO細胞培養(yǎng)上清液濃度的降低增殖抑制率逐漸降低。2. qRT-PCR顯示 PTEN mRNA表達增加。Western blotting結(jié)果顯示H3K4me3、PTEN表達增加，同時PI3K、p-Akt

4、、HIF-1α和VEGF表達降低。
　　結(jié)論：1. LOVO細胞組蛋白單 ADP核糖基化減少后能顯著抑制HUVECs的遷移和增殖能力，提示單 ADP核糖基化可能通過參與HUVECs增殖和運動的調(diào)節(jié)。2. LOVO細胞組蛋白單ADP核糖基化減少可以提高H3K4me3和PTEN的表達，同時降低細胞內(nèi)PI3K、p-Akt、HIF-1α、VEGF的表達。提示LOVO細胞組蛋白單ADP核糖基化減少導致H3k4me3和PTEN的增加，從而減少