日本囊對(duì)蝦黏著斑激酶和ADP核糖基化因子的研究.pdf

1、本研究論文對(duì)日本囊對(duì)蝦的黏著斑激酶(MjFAK)及小G蛋白ADP核糖基化因子(MjArf4)進(jìn)行了初步研究，同時(shí)建立一套有效的噬菌體展示庫(kù)篩選方法以尋找與它們相互作用的蛋白，為今后研究MjFAK及小G蛋白在WSSV感染中的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制奠定基礎(chǔ)。 FAK是一類(lèi)非受體酪氨酸激酶，在高等生物中已經(jīng)被廣泛報(bào)道參與細(xì)胞的粘附、抗凋亡、actin重組以及腫瘤的發(fā)生。我們首次在甲殼綱動(dòng)物中克隆到FAK。序列分析發(fā)現(xiàn)MjFAK中間含有保守的P

2、TK結(jié)構(gòu)域和C端的FAT結(jié)構(gòu)域。MjFAK的Tyr399，Tyr579被證實(shí)發(fā)生磷酸化。另外，在WSSV病毒感染日本囊對(duì)蝦的早期，其血細(xì)胞MjFAK蛋白的表達(dá)水平上調(diào)，引起MjFAK(pY399)和MjFAK(pY579)水平的上升。研究感染病毒的血細(xì)胞對(duì)Fn(Fibronectin)的粘附情況還發(fā)現(xiàn)，血細(xì)胞對(duì)Fn的粘附與MjFAK磷酸化水平相關(guān)。因此，我們推斷對(duì)蝦血細(xì)胞MiFAK在病毒入侵及宿主防御中都扮演重要角色。 Arf

3、s屬于Ras家族的小G蛋白，我們從日本囊對(duì)蝦中克隆一個(gè)屬于ClassⅡ的Arf(命名為MjArf4)。研究發(fā)現(xiàn)，WSSV感染72 h后，MjArf4的表達(dá)水平顯著上升，提示MjArf4與病毒感染有著密切聯(lián)系。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)在MjArf4啟動(dòng)子-18 bp處含有一個(gè)保守的CRE(cAMP response elemem)，啟動(dòng)子活性分析表明該CRE在轉(zhuǎn)錄調(diào)控中可能有抑制MjArf4轉(zhuǎn)錄的作用。將MjArf4轉(zhuǎn)染入High Five昆蟲(chóng)細(xì)胞