心肌老化與非酶糖基化的相關(guān)研究.pdf

1、目的:機(jī)體衰老是老年人所面臨的共同病理、生理發(fā)展過程，如何延緩衰老，是目前老年醫(yī)學(xué)熱門研究課題，而只有明確其機(jī)制，才能有的放矢地去干預(yù)和治療。研究衰老、老年病的發(fā)病機(jī)制，需要可靠的衰老模型，應(yīng)用自然衰老模型成本高，周期長，目前國內(nèi)外根據(jù)衰老學(xué)說已研制出較多的衰老動物模型，我國學(xué)者根據(jù)非酶糖基化交聯(lián)學(xué)說研制出D-半乳糖衰老動物模型，但此模型有關(guān)心血管系統(tǒng)在組織、細(xì)胞及分子水平缺少系統(tǒng)性研究，特別與自然衰老之間的可比性試驗資料較少，因此本試

2、驗分別從心臟整體結(jié)構(gòu)及心功能水平，電鏡下心肌細(xì)胞及超微結(jié)構(gòu)的變化、心肌組織內(nèi)非酶糖基化終末期產(chǎn)物、抗氧化物質(zhì)的含量，及線粒體DNA的缺失率，觀察2組的相關(guān)性，為制作D-半乳糖模型提供老化依據(jù)，同時探討心肌衰老發(fā)生發(fā)展的途徑。 非酶糖基化與心肌老化有明顯相關(guān)性，它可以通過AGEs的形成，觸發(fā)氧化應(yīng)激，從而導(dǎo)致線粒體DNA突變，引起心肌結(jié)構(gòu)及功能的改變，目前有什么途徑能阻止其產(chǎn)生和發(fā)展，減少或逆轉(zhuǎn)對心肌的損傷呢?已成為研究的熱門話題

3、，但都處于動物實驗及臨床試驗階段。在國外研制出AGEs交聯(lián)蛋白裂解劑，4,5-Dimethyl-3-(2-OXO-Phenylethyl)-Thiazolium Chloride (ALT-711)，它可以使已經(jīng)被AGEs修飾的蛋白裂解，恢復(fù)蛋白的結(jié)構(gòu)及功能，本試驗經(jīng)過ALT-711對自然衰老及D-半乳糖模型衰老的干預(yù)治療，觀察其心臟結(jié)構(gòu)及功能的改變，及組織AGEs和抗氧化能力的變化，mtDNA缺失的情況，為心臟衰老的治療尋找試驗依據(jù)。

4、中醫(yī)中藥在延年益壽抗衰老方面已有悠久歷史，銀杏葉是目前國內(nèi)外廣泛關(guān)注和熱門的中藥，銀杏葉提取物(EGB)具有多種藥用價值，已被國內(nèi)外認(rèn)可，許多西方國家大量進(jìn)口銀杏葉，進(jìn)行提取制成口服或注射液出口，國內(nèi)銀杏葉產(chǎn)量大，已被廣泛用于治療心腦血管疾病，但銀杏葉對心肌老化的作用，目前報導(dǎo)較少。本研究旨在探討銀杏葉對自然衰老和D．半乳糖衰老模型心肌的干預(yù)治療作用，觀察電鏡下心肌超微結(jié)構(gòu)、心臟二維超聲結(jié)構(gòu)及功能、心肌內(nèi)組織水平AGEs的水平，抗氧化物

5、質(zhì)SOD、GSH-Px的活性，及氧化產(chǎn)物：MDA的變化，以ALT-711為對照組，觀察銀杏葉對心肌的抗衰老作用，為中藥抗心肌老化，提供依據(jù)。 方法分組： 1.SD健康成年雄性大鼠20只(180-220g)，分為D．半乳糖老化模型組、對照組(每組各1O只)。建立D-半乳糖老化模型：每天予D-半乳糖50mg/kg/d腹部皮下注射，對照組每天給予同等容量的生理鹽水皮下注射；另設(shè)自然老化組10只(20-22月齡)。2．ALT-7

6、11干預(yù)治療組：在2種衰老模型各10只，均給予ALT-711以10mg/kg．day灌胃。 2．銀杏葉提取液干預(yù)治療組：2種衰老模型各10只，均給予EGB100mg/kg．day口服，連續(xù)觀察16周。于實驗第16周在10％戊巴比妥(1ml/100g)靜脈麻醉后常規(guī)探查心臟結(jié)構(gòu)及血流并測定心功能。取心肌組織電鏡下觀察心肌的超微結(jié)構(gòu)，測定心肌內(nèi)AGEs含量，抗氧化指標(biāo)SOD、GSH-Px、MDA及線粒體DNA的缺失率。 結(jié)果

7、： 1、自然衰老和半乳糖組分別與正常組比較，電鏡下結(jié)構(gòu)有相似的結(jié)構(gòu)紊亂，包括肌絲斷裂，潤盤模糊，線粒體腫脹，心臟二維超聲結(jié)構(gòu)提示左心室心肌肥厚，重量增加，心臟功能減退，2組衰老組心肌內(nèi)AGEs含量增加(P<0.05)，抗氧化指標(biāo)SOD、GSH-Px減少(P<0.05)，氧化代謝產(chǎn)物MDA增加(P<0.05)，線粒體DNA的缺失率增加(P<0.05)，2組衰老組之間無顯著性差別。 2、2組衰老組經(jīng)ALT-711干預(yù)治療后，

8、電鏡心臟超微結(jié)構(gòu)有改善，包括肌絲排列整齊，線粒體致密，無水腫，潤盤清晰和連續(xù)，心臟二維超聲提示2組衰老組心肌的重塑均有改善，包括室間隔厚度減輕，左室重量減輕，心臟的舒張功能提高(p

9、排列整齊，線粒體致密，無水腫，潤盤清晰和連續(xù)，心臟二維超聲提示2組衰老組心肌的重塑均有改善，包括室間隔厚度減輕，左室重量減輕，心臟的舒張功能提高(p<0.05)，心肌內(nèi)AGEs含量減少(P<0.05)，抗氧化指標(biāo)SOD、GSH-Px增加(P<0.05)，氧化代謝產(chǎn)物MDA減少，線粒體DNA的缺失率減少(P<0.05)。 結(jié)論： 1、自然衰老和半乳糖衰老模型具有形似的形態(tài)學(xué)改變，具有可比性，同時衰老和非酶糖基化及氧化應(yīng)激相