臍血造血干細(xì)胞歸巢缺陷的修復(fù)—巖藻糖基化轉(zhuǎn)移酶Ⅶ與巖藻糖基化轉(zhuǎn)移酶Ⅵ的比較研究.pdf

1、目的:比較FTⅦ、FTⅥ介導(dǎo)的體外巖藻糖基化修復(fù)臍血造血干細(xì)胞表面選擇素配體功能缺陷的能力;比較FTⅦ、FTⅥ提高臍血造血干細(xì)胞歸巢植入能力的作用;研究FTⅦ對植入的臍血造血干細(xì)胞自我更新及造血重建能力的影響。
　　方法:收集健康足月產(chǎn)婦的新鮮臍血,利用免疫磁珠分離純化出臍血CD34+HSC,分別用FTⅥ、FTⅦ對臍血CD34+HSC進行體外巖藻糖基化處理,采用流式細(xì)胞儀檢測處理后的CD34+HSC表面PSGL-1功能基團sLex

2、的表達(dá)水平,并比較兩種酶處理后CD34+HSC與P、E-選擇素的結(jié)合能力。利用平行板流動小室技術(shù)模擬生理狀態(tài)下的血流,比較流動狀態(tài)下經(jīng)不同酶處理的CD34+HSC在P、E-選擇素表面緩慢滾動、粘附的能力。設(shè)立實驗分組(空白對照組、陰性對照組、FTⅥ巖藻糖基化組、FTⅦ巖藻糖基化組、FTⅥ/FTⅦ聯(lián)合巖藻糖基化組),對新鮮分離純化的臍血CD34+HSC分別進行不同酶介導(dǎo)的巖藻糖基化處理,建立NSG小鼠移植模型,按分組分別對實驗小鼠進行人C

3、BT,用流式細(xì)胞儀監(jiān)測移植后小鼠外周血中人CD45+細(xì)胞的表達(dá)水平直至移植后10周,比較臍血造血干細(xì)胞的植入率及植入速率。移植第10周處死小鼠,采集外周血及骨髓檢測人各系造血細(xì)胞標(biāo)記物的表達(dá)水平,比較臍血造血干細(xì)胞植入后的自我更新及造血重建能力。
　　結(jié)果:FTⅥ和FTⅦ介導(dǎo)的巖藻糖基化均能提高臍血CD34+HSC表面sLex的表達(dá)水平并使其達(dá)到飽和。FTⅥ、FTⅦ巖藻糖基化處理后臍血CD34+HSC與P-、E-選擇素的結(jié)合能力均

4、明顯增強,其中FTⅦ處理后的HSPCs與P-選擇素的結(jié)合能力比FTVI強。FTⅦ巖藻糖基化的臍血CD34+細(xì)胞在流動狀態(tài)下與P、E-選擇素結(jié)合能力比FTⅥ強。FTⅥ/FTⅦ聯(lián)合處理的臍血CD34+細(xì)胞與P、E-選擇素的結(jié)合明顯高于FTⅥ或FTⅦ單獨處理組。人臍血CD34+HSC移植后第4、6周FTⅦ處理組小鼠外周血人CD45+細(xì)胞百分比明顯高于FTⅥ處理組及陰性對照組;FTⅥ/FTⅦ聯(lián)合處理組亦比單獨FTⅦ、FTⅥ處理組高。移植后第10

5、周,FTⅦ巖藻糖基化處理組移植小鼠骨髓中的CD34+細(xì)胞明顯高于陰性對照組;FTⅦ處理組移植小鼠的骨髓及外周血中能檢測出分化成熟的各系標(biāo)記物陽性細(xì)胞,且與陰性對照組相比標(biāo)記物陽性細(xì)胞的百分比并不減少;FTⅦ處理組的小鼠骨髓中CD3、CD33的表達(dá)水平顯著高于FTⅥ組。
　　結(jié)論:FTⅦ相比FTⅥ更能促進臍血HSPC的早期植入,提高植入速率。FTⅦ介導(dǎo)的巖藻糖基化處理并不影響造血干細(xì)胞的自我更新,也不減弱造血干細(xì)胞造血重建的能力。F