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文檔簡介
1、目的:觀察RNA干擾沉默Nampt蛋白對體外培養(yǎng)的SKOV3人卵巢癌細(xì)胞生長的影響,并探討其作用機制。
方法:(1)Nampt蛋白的shRNA質(zhì)粒的構(gòu)建。(2)Nampt蛋白特異性shRNA表達(dá)載體 shRNA-Nampt經(jīng)LipofectamineTM2000介導(dǎo)轉(zhuǎn)染人卵巢癌SKOV3細(xì)胞。(3)噻唑藍(lán)(MTT)法檢測shRNA-Nampt卵巢癌SKOV3細(xì)胞生存率的影響。(4)流式細(xì)胞儀檢測Nampt低表達(dá)對SKOV3細(xì)胞
2、增殖的影響。(5)QRT-PCR和Western-blotting檢測低表達(dá)Nampt蛋白對人卵巢癌SKOV3細(xì)胞NAD、SIRT1、P53蛋白分子表達(dá)的影響。
結(jié)果:(1)成功構(gòu)建Nampt蛋白的shRNA質(zhì)粒并鑒定。(2)Nampt蛋白特異性shRNA表達(dá)載體shRNA-Nampt經(jīng)LipofectamineTM2000介導(dǎo)轉(zhuǎn)染人卵巢癌SKOV3細(xì)胞后Nampt蛋白表達(dá)降低。(3)MTT結(jié)果顯示shRNA-Nampt組人卵
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