大蒜素誘導(dǎo)人卵巢癌細胞SKOV3凋亡機制研究.pdf

1、研究目的：
　　 大蒜素是從大蒜中分離提取的一種重要成分，以往的研究顯示，大蒜素可顯著抑制卵巢癌細胞H08910和OVCA-3的生長，并誘導(dǎo)細胞凋亡。然而，大蒜素誘導(dǎo)卵巢癌細胞凋亡的機制并不十分清楚。本研究以人卵巢癌SKOV3細胞為實驗對象，闡明大蒜素誘導(dǎo)卵巢癌細胞凋亡的作用機制。
　　 主要方法：
　　 采用CCK-8法測定大蒜素對SKOV3細胞增殖活性的效應(yīng)；AnnexinV-FITC/PI雙染法流式細胞術(shù)(

2、FCM)檢測凋亡率的變化；FCM檢測細胞周期分布；磷酸化蛋白激酶芯片檢測信號通路的活化情況，由免疫印跡實驗進一步證實。
　　 主要結(jié)果：
　　 (1)不同濃度大蒜素作用不同時間對SKOV3細胞的增殖抑制作用：CCK-8法檢測結(jié)果顯示一定濃度范圍的大蒜素對SKOV3細胞的生長具有明顯的抑制作用，且呈時間-劑量依賴性。不同濃度組分別作用于SKOV3細胞24、48、72h，其抑制率差異有顯著性意義(P<0.05)。利用中效方程

3、得出，48h的IC50為22.23μg/m。
　　 (2)大蒜素對SKOV3細胞周期的影響：12.5μg/ml、25μg/ml濃度大蒜素作用SKOV3細胞48h后，細胞周期發(fā)生變化。各實驗組G1期細胞百分比降低，S期細胞百分比無明顯變化，G2期細胞百分比增高，細胞顯著阻滯于G2期，與對照組比較有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。
　　 (3)大蒜素對SKOV3細胞凋亡的影響：12.5μg/ml、25μg/ml濃度大蒜素作用48

4、h后細胞凋亡率隨著藥物濃度的增加而增加，早晚期凋亡率(％)分別為7.37±1.21、15.87±1.65，與對照組(2.33±0.42)比較均明顯提高(P<0.01)；加入JNK信號通路抑制劑(SP600125)20μM作用15min后，凋亡率明顯減低(P<0.01)。
　　 (4)磷酸化蛋白激酶芯片對大蒜素激活的信號通路的篩選：12.5μg/ml的大蒜素作用24h后，磷酸化蛋白激酶芯片結(jié)果顯示，P53(S46)、AKT(T30

5、8)和]c-Jun(S63)等信號通路被激活。
　　 (5)大蒜素對JNK通路激活的影響：(0-100μg/ml)的大蒜素作用15min后，JNK蛋白的磷酸化隨著濃度的增加明顯增加；25μg/ml的大蒜素作用不同時間后，JNK的磷酸化在15min最強；加入SP600125后JNK的磷酸化明顯受到抑制。表明大蒜素誘導(dǎo)SKOV3細胞凋亡與JNK通路有關(guān)。
　　 (6)大蒜素對線粒體凋亡通路的影響：25μg/ml的大蒜素作用S

6、KOV3細胞(0、6h、12h)后，在胞漿蛋白中，Bax蛋白的表達量明顯減弱，CytC蛋白的表達則顯著增強；而線粒體Bax、CytC蛋白表達正好相反。加入SP600125后，在胞漿蛋白中，Bax蛋白的表達增加，CytC蛋白的表達減弱；而線粒體蛋白表達正好相反。表明JNK的活化，包括Bcl-2家族的活化，引發(fā)了線粒體介導(dǎo)的凋亡信號通路的活化，導(dǎo)致Bax遷移后的大量堆積和CytC的釋放，導(dǎo)致卵巢癌SKOV3細胞凋亡。
　　 結(jié)論：<