趨化因子CXCL16及其受體CXCR6維持CD133+卵巢癌干細胞侵襲遷移能力的研究.pdf

1、研究背景:
　　盡管科研人員投入了大量精力及研究經(jīng)費，卵巢癌仍然是一個非常致命的疾病。到目前為止，尚無早期發(fā)現(xiàn)卵巢癌的有效篩查方法，大多數(shù)患者被診斷出癌癥時已發(fā)生轉移。目前治療卵巢癌的主要方法是減瘤根治術及術后鉑類和紫杉醇的化療。較新療法包括分子靶向治療和腹膜內(nèi)化療可以稍延長生存時間，但大多數(shù)患者最終愈后不良。術前就已經(jīng)轉移和術后化療抵抗及復發(fā)是治療卵巢癌的主要問題。研究卵巢癌化療抵抗及轉移的具體途徑和機制對患者意義重大，會使患者

2、的治療效果得到顯著改善。在許多惡性腫瘤中，都存在一個亞群的腫瘤細胞，只占極低比例，但是能決定腫瘤的發(fā)生發(fā)展，稱為腫瘤干細胞(cancer stem cells，CSCs)。這些CSCs被認為是腫瘤發(fā)生、轉移及術后化療抵抗的根本原因。趨化因子結合到相應受體激活下游信號通路后參與腫瘤增殖及轉移。最近研究表明，趨化因子可以刺激CSCs上特異受體激活相關通路從而促進其自我更新和侵襲轉移。比如表達CXCR1的乳腺癌干細胞與CXCL8結合后維持自我

3、更新和侵襲能力;CD133+CXCR4+CSCs是胰腺癌轉移不可或缺的因素;CXCR4+腦膠質瘤干細胞在其配體CXCL12的趨化下啟動了膠質瘤的轉移。這些研究結果表明，CSCs參與的腫瘤轉移部分是通過趨化因子介導，因此CSCs的轉移潛能是可能被抑制的。迄今為止，科學家已證明存在CD133+卵巢腫瘤干細胞(ovarian cancer stemcells，OCSCs)，并分別從病人腫瘤、腹水及細胞株中成功分離出OCSCs。但是何種因子維持

4、OCSCs自我更新及侵襲遷移能力尚未可知，本課題組在前期實驗中已從卵巢癌細胞系A2780中成功分離、鑒定出OCSCs，通過PCR-array檢測發(fā)現(xiàn)，OCSCs相對于CD133-非卵巢癌干細胞(non ovarian cancer stem cells，nOCSCs)高表達趨化因子CXCL16及其受體CXCR6?；谝陨涎芯?，我們設想OCSCs可能通過自分泌CXCL16結合到CXCR6維持其生物學行為，本研究將對OCSCs的針對性治療策

5、略提供理論依據(jù)。
　　目的:
　　1.比較CXCL16和CXCR6在CD133+OCSCs和CD133-nOCSCs之間的表達差異
　　2.探討CXCL16/CXCR6軸在CD133+OCSCs增殖及侵襲遷移中的作用
　　方法:
　　1.Real-time PCR檢測OCSCs與nOCSCs中CXCL16及CXCR6在mRNA水平的表達差異。
　　2.ELISA檢測OCSCs與nOCSCs中CXCL1

6、6在蛋白水平的表達差異。
　　3.流式細胞術檢測OCSCs與nOCSCs細胞表面CXCR6的陽性率。
　　4.CCK-8法檢測中和抗體阻斷CXCL16后OCSCs增殖能力的變化。
　　5.Transwell實驗檢測中和抗體阻斷或shRNA沉默CXCL16后OCSCs侵襲遷移能力的變化。
　　6.Transwell實驗檢測中和抗體阻斷CXCR6后OCSCs侵襲遷移能力的變化。
　　結果:
　　1.OCS

7、Cs較nOCSCs高表達CXCL16 mRNA(4.59±0.73)倍，高表達CXCR6mRNA（18.24±0.77）倍(P＜0.01)。
　　2.OCSCs的CXCL16分泌量為（2434.00±204.65）ng/ml，而nOCSCs的CXCL16分泌量為（129.33±31.64）ng/ml，(P＜0.01)。
　　3.OCSCs表面CXCR6表達率為（60.6±5.3）％，而nOCSCs只有（6.4±1.6）％，(

8、P＜0.01)。
　　4.CCK-8檢測結果顯示，與對照組相比，當OCSCs分泌的CXCL16被中和抗體阻斷后，OD(450)值在96h內(nèi)無明顯差異(P＞0.05)。
　　5.CXCL16中和抗體阻斷實驗:遷移細胞數(shù):對照組為(43.00-4.00)個/視野，CXCL16中和抗體組為（21.33±3.06）個/視野(P＜0.01)。侵襲細胞數(shù):對照組為(44.58±4.51)個/視野，CXCL16中和抗體組為(18.00±4

9、.00)個視野(P＜0.01)。
　　CXCL16-shRNA沉默實驗:遷移細胞數(shù):對照shRNA組為(59.33±2.52)個/視野，CXCL16-shRNA組為(28.00±3.00)個/視野，(P＜0.01)。侵襲細胞數(shù):對照shRNA組為(63.67±3.51)個/視野，CXCL16-shRNA組為(28.67±4.04)個/視野，(P＜0.01)。
　　6.CXCR6中和抗體阻斷實驗:遷移細胞數(shù):對照組為(64.6

10、7±4.16)個/視野，CXCR6中和抗體組為(33.17±5.03)個/視野，(P＜0.01)。侵襲細胞數(shù):對照組為(55.67±3.51)個/視野，CXCR6中和抗體組為(24.33±4.04)個/視野，(P＜0.01)。
　　結論:
　　1.相對于nOCSCs，OCSCs在基因水平和蛋白水平都高表達CXCL16及CXCR6。
　　2.趨化因子CXCL16不影響OCSCs的增殖能力。
　　3.CD133+卵巢