趨化因子受體CXCR7對(duì)宮頸癌SiHa細(xì)胞的功能研究.pdf

1、目的:CXCR7作為CXCL12的受體之一，參與多種惡性腫瘤的發(fā)展，遷移等過(guò)程。但其對(duì)人宮頸癌的作用及分子機(jī)制尚不清楚。本研究將探討CXCR7對(duì)宮頸癌癌細(xì)胞SiHa的可能作用。
　　方法:構(gòu)建CXCR7特異性的shRNA干擾載體，siRNA片段通過(guò)Lipofectamine2000瞬時(shí)轉(zhuǎn)染宮頸鱗癌SiHa細(xì)胞株。實(shí)驗(yàn)分為實(shí)驗(yàn)組、陰性對(duì)照組和空白對(duì)照組。分別用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(quantitative real time P

2、CR，qRT-PCR)和Western Blot法檢測(cè)各組細(xì)胞中CXCR7的mRNA和蛋白質(zhì)的表達(dá)量;通過(guò)MTT實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)分別檢測(cè)轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞增殖，遷移情況;免疫組織化學(xué)SP法檢測(cè)50例宮頸癌患者癌組織及50例癌旁組織中CXCL12、CXCR7、MMP-9蛋白的表達(dá)，并分析三者與宮頸癌浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移等臨床病理參數(shù)的相關(guān)性。
　　結(jié)果:CXCR7基因在受干擾后，Western Blot法測(cè)定結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)組蛋白表達(dá)水平(0.49±

3、0.06)較空白對(duì)照組(2.37±0.18)降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.01);MMP-9蛋白表達(dá)水平(0.34±0.09)較空白對(duì)照組(2.44±0.26)降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.01);觀察SiHa細(xì)胞的增殖變化，發(fā)現(xiàn)干擾48h后吸光度值(0.202±0.026)小于空白對(duì)照組細(xì)胞(0.786±0.013)(p＜0.05)，表明SiHa細(xì)胞增殖減慢;細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)觀察SiHa細(xì)胞的遷移能力，結(jié)果顯示劃痕72小時(shí)后實(shí)驗(yàn)組

4、遷移距離(41.67±1.52)顯著低于空白對(duì)照組(191±1.3)。CXCL12、CXCR7、MMP-9在宮頸癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為60％(30/50)、62％(31/50)、64％(32/50)，高于其癌旁組織(p＜0.05）。CXCL12與CXCR7在宮頸癌組織中表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.791和p＜0.001值);CXCR7與MMP-9在宮頸癌組織中表達(dá)呈正相關(guān)（r=0.443和p＜0.001值）。CXCL12、CXCR7、MM

5、P-9蛋白在中低分化宮頸癌組織中表達(dá)率(76％、86％、86％)高于高分化宮頸癌(48％、45％、48％)。同時(shí)它們?cè)诹馨徒Y(jié)轉(zhuǎn)移的宮頸癌組織中表達(dá)率(93％，68％，79％)高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(18％，55％，45％)。
　　結(jié)論：CXCR7在宮頸癌組織中的表達(dá)較癌旁正常組織顯著性增高，并與CXCL12和MMP-9表達(dá)呈正相關(guān)。CXCR7基因能夠促進(jìn)宮頸癌細(xì)胞的增殖，遷移和侵襲。其有望成為臨床上判斷宮頸癌侵襲和轉(zhuǎn)移的有效標(biāo)志物及治