基質(zhì)細(xì)胞衍生因子1受體CXCR7在急性白血病表達(dá)及作用的初步研究.pdf

1、目的：
　　 白血病細(xì)胞的快速增殖、黏附、遷移和耐藥是急性白血病重要的生物學(xué)特性，也是造成該類惡性血液疾病臨床治療失敗的重要原因。既往研究表明，基質(zhì)細(xì)胞衍生因子(stromal cell derived factor，SDF)1及其受體CXCR4(CXC chemokine receptor4，CXCR4)所組成的受配體系統(tǒng)可通過改造白血病骨髓微環(huán)境，從而在造血干細(xì)胞歸巢和動員、造血微環(huán)境中腫瘤細(xì)胞的定植、增殖、黏附、浸潤以及腫

2、瘤血管形成等環(huán)節(jié)發(fā)揮重要作用。
　　 CXCR7(CXC chemokine receptor7，CXCR7)是一種新近發(fā)現(xiàn)的SDF-1新受體，屬于G蛋白偶聯(lián)7次跨膜受體家族成員之一，基因圖譜定位于編碼CXCR1、CXCR2及CXCR4的小鼠1號染色體和人類2號染色體，共包含362個氨基酸序列。通過對實體瘤的研究發(fā)現(xiàn)，CXCR7表達(dá)于多種腫瘤細(xì)胞中；配體活化后的CXCR7能夠調(diào)控腫瘤細(xì)胞的增殖和凋亡；SDF-1/CXCR7軸通過

3、調(diào)節(jié)相關(guān)細(xì)胞黏附分子的水平，增強腫瘤細(xì)胞的黏附能力和侵襲性；過表達(dá)CXCR7能夠通過上調(diào)IL-8(interleukin-8)和VEGF(vascularendothelial growth factor)的水平促進腫瘤新生血管和腫瘤血管網(wǎng)的形成。使用CXCR7小分子拮抗劑、siRNA技術(shù)以及抗體封閉等手段能夠顯著抑制體內(nèi)乳腺癌、肺癌、前列腺癌等惡性腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移，因此SDF-1/CXCR7可能成為靶向治療惡性腫瘤的一個新途徑。

4、>　　 目前國內(nèi)外關(guān)于CXCR7在惡性血液腫瘤中表達(dá)及其作用方面的研究尚未見報道。本實驗在我們以往對白血病SDF-1/CXCR4研究的基礎(chǔ)上，探討CXCR7蛋白在急性白血病(Acute leukemia，AL)骨髓細(xì)胞和急性白血病細(xì)胞株中的表達(dá)情況，并通過抗CXCR7單克隆抗體11G8特異性阻抑SDF-1/CXCR7軸后，觀察與骨髓基質(zhì)細(xì)胞共培養(yǎng)的THP-1細(xì)胞增殖及黏附能力變化。本實驗通過上述研究，探討CXCR7表達(dá)水平與急性白血病

5、的關(guān)系以及其與CXCR4作用之間的異同，了解阻抑SDF-1/CXCR7軸后白血病細(xì)胞生物學(xué)特性的變化，為探索治療急性白血病的新方法提供可靠的實驗依據(jù)。
　　 方法：
　　 1.急性白血病骨髓細(xì)胞CXCR7表達(dá)的研究
　　 收集25例急性淋巴細(xì)胞白血病(Acute lymphocytic leukemia，ALL)患者、19例急性髓系白血病(Acute myeloid leukemia，AML)患者和17例正常對照

6、骨髓標(biāo)本：
　　 (1)應(yīng)用流式細(xì)胞技術(shù)檢測骨髓單個核細(xì)胞CXCR7表達(dá)；
　　 (2)應(yīng)用Western-blot法檢測骨髓單個核細(xì)胞CXCR7表達(dá)。
　　 2.急性白血病細(xì)胞株CXCR7表達(dá)的研究
　　 (1)培養(yǎng)人急性單核細(xì)胞白血病細(xì)胞株THP-1，人急性早幼粒細(xì)胞白血病細(xì)胞株HL-60，人急性T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞株Jurkat；
　　 (2)應(yīng)用流式細(xì)胞技術(shù)檢測各型急性白血病細(xì)胞株CXCR

7、7的表達(dá)。
　　 3.抗CXCR7單克隆抗體11G8阻抑CXCR7對急性白血病細(xì)胞株THP-1體外增殖及黏附的影響
　　 (1)培養(yǎng)人急性單核細(xì)胞白血病細(xì)胞株THP-1，收集10例正常骨髓標(biāo)本；
　　 (2)分離培養(yǎng)正常骨髓標(biāo)本的骨髓基質(zhì)細(xì)胞；
　　 (3)建立骨髓基質(zhì)細(xì)胞和THP-1細(xì)胞共培養(yǎng)模型；
　　 (4)CCK-8法檢測11G8阻抑CXCR7后共培養(yǎng)中THP-1細(xì)胞增殖能力；
　　

8、 (5)CCK-8法檢測11G8阻抑CXCR7后共培養(yǎng)中THP-1細(xì)胞黏附率。
　　 結(jié)果：
　　 1.急性白血病骨髓細(xì)胞CXCR7表達(dá)的研究
　　 (1)AML組CXCR7表達(dá)水平為19.03±3.84%，ALL組為3.34±1.71%，正常組為2.40±1.27%。(2)AML組與正常組相比，CXCRT表達(dá)水平明顯增高(P<0.01)。(3)AML組與ALL組相對比，CXCR7表達(dá)水平明顯增高(P<0.01

9、)。(4)ALL組與正常組對比，CXCR7表達(dá)水平的差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
　　 2.急性白血病細(xì)胞株CXCR7表達(dá)的研究
　　 (1)THP-1細(xì)胞CXCR7表達(dá)水平為69.05±3.04%，HL-60細(xì)胞CXCR7表達(dá)水平為20.17±1.53%，Jurkat細(xì)胞CXCR7表達(dá)水平為3.41±2.46%。(2)THP-1細(xì)胞CXCR7表達(dá)高于HL-60細(xì)胞(P<0.01)，而HL-60細(xì)胞CXCR7表達(dá)又

10、明顯高于Jurkat細(xì)胞(P<0.01)。
　　 3.11G8阻抑CXCR7對急性白血病細(xì)胞株THP-1體外增殖及黏附的影響
　　 (1)成功建立骨髓基質(zhì)細(xì)胞與白血病THP-1細(xì)胞株共培養(yǎng)模型，基質(zhì)細(xì)胞及THP-1細(xì)胞生長良好。(2)在培養(yǎng)48小時內(nèi)細(xì)胞增殖不明顯，各組THP-1細(xì)胞生長曲線變化趨勢類似；48小時之后進入對數(shù)生長期。處于對數(shù)生長期的兩組THP-1細(xì)胞增殖速度相比較，兩條生長曲線上升幅度不一，對照組曲線上升

11、幅度明顯高于實驗組，表明11G8處理后THP-1細(xì)胞增殖速度明顯減弱(P<0.05)。(3)培養(yǎng)24小時兩組THP-1細(xì)胞黏附率顯示，對照組中THP-1細(xì)胞黏附率為(39.16±5.33)%，而實驗組中THP-1細(xì)胞黏附率僅為(14.24±3.70)%，明顯低于對照組(P<0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1.CXCR7在急性髓系白血病組骨髓標(biāo)本中高表達(dá)，且均高于急性淋巴細(xì)胞白血病組和正常組，提示CXCR7可能與急性髓系