新診斷急性粒細胞白血病剪接因子異常表達研究.pdf

1、背景：
　　 選擇性剪接是指細胞選擇性地對前mRNA剪接位點的組合剪接加工，形成不同的成熟mRNA，從而使一個基因產(chǎn)生若干具有獨特結(jié)構(gòu)和功能的蛋白異構(gòu)體的過程。最近研究報道，多達94％的人類基因都發(fā)生了選擇性剪接，并且該過程的異常與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。
　　 大量研究顯示，急性粒細胞白血病(AML)患者體內(nèi)普遍存在著異常的選擇性剪接，并且這可能是AML發(fā)生、發(fā)展的關(guān)鍵分子基礎(chǔ)。目前認為，AML中大量存在的異常剪接事

2、件可能與患者體內(nèi)剪接調(diào)控因子發(fā)生的顯著變化密切相關(guān)。最近關(guān)于剪接調(diào)控因子的研究有很多，但遺憾的是到目前為止，還沒有相關(guān)的研究關(guān)注AML患者體內(nèi)剪接調(diào)控因子的表達情況。另外，caspase-8是一種關(guān)鍵的凋亡相關(guān)蛋白水解酶，在選擇性剪接作用下，caspase-8 pre-mRNA至少可以產(chǎn)生7種不同的成熟mRNA，進而編碼出相應(yīng)的蛋白質(zhì)異構(gòu)體發(fā)揮各自不同的生物學作用。已有研究報道，caspase-8在AML中存在異常的剪接行為，并且這與白

3、血病細胞的抗凋亡密切相關(guān)。
　　 本研究擬用實時熒光定量PCR(qRT-PCR)技術(shù)檢測新診斷AML患者體內(nèi)8個剪接調(diào)控因子[7個SR蛋白家族成員和1個主要的剪接負調(diào)節(jié)蛋白，即SRSF1(SF2/ASF)，SRSF2(SC35)，SRSF3(SRp20)，SRSF4(SRp75)，SRSF5(SRp40)，SRSF6(SRp55)，SRSF7(9G8)和hnRNPA1]mRNA水平的變化，以觀察各種剪接因子的特異性變化規(guī)律，探討

4、應(yīng)用qRT-PCR方法檢測剪接調(diào)控因子表達水平在AML診斷、預后和治療中的潛在意義。另一方面擬運用凝膠電泳檢測AML中CASP8的剪接模式，并統(tǒng)計分析剪接因子mRNA水平的變化與CASP8剪接模式的潛在關(guān)系，以初步探討AML中CASP8發(fā)生異常剪接的機制，及其在AML治療中潛在的價值。
　　 方法：
　　 共采集26例新診斷AML患者和26例健康對照者外周血標本，分離單個核細胞后提取總RNA，運用qRT-PCR方法檢測8

5、個剪接調(diào)控因子mRNA相對表達量。同時，運用凝膠電泳檢測CASP8的剪接模式，統(tǒng)計分析各剪接因子的特異性變化規(guī)律，CASP8剪接模式的變化及剪接因子表達量與CASP8剪接模式的潛在關(guān)系。
　　 結(jié)果：
　　 1.與健康對照組相比，新診斷AML患者體內(nèi)剪接因子的表達發(fā)生了顯著改變，SRSF1，SRSF3和SRSF4mRNA表達量減低；SRSF1/HNRNPA1比值和SRSF1/SRSF3比值也減低，差異均有統(tǒng)計學意義。

6、r>　　 2.AML中CASP8的剪接模式不同于健康對照組，CASP8L在AML中表達較高，CASP8A在對照組中表達較高，AML中CASP8L/CASP8A比值高于健康對照組，差異均有統(tǒng)計學意義。
　　 3.在AML中，SRSF3和CASP8L，SRSF3和CASP8L/CASP8A比值，SRSF4和CASP8L之間有顯著相關(guān)性，對照組中未發(fā)現(xiàn)該相關(guān)性。
　　 結(jié)論：
　　 1.新診斷AML患者體內(nèi)多種剪接因