嗜酸性粒細(xì)胞和急性白血病細(xì)胞之間相互作用的研究.pdf

1、[目的]
　　 通過細(xì)胞體外實驗，研究嗜酸性粒細(xì)胞和白血病細(xì)胞之間的相互作用。
　　 [方法]
　　 1.使用白血病細(xì)胞培養(yǎng)液上清，培養(yǎng)嗜酸性粒細(xì)胞，通過CCK-8分析和DAPI染色嗜酸性粒細(xì)胞，熒光顯微鏡觀察其細(xì)胞核變化的方法，探討白血病細(xì)胞培養(yǎng)上清和嗜酸性粒細(xì)胞存活的關(guān)系。
　　 2.用嗜酸性粒細(xì)胞作效應(yīng)細(xì)胞、白血病細(xì)胞為靶細(xì)胞，進(jìn)行白血病細(xì)胞增殖抑制實驗。用CFSE標(biāo)記、流式細(xì)胞儀(FCM)檢測，觀

2、察嗜酸性粒細(xì)胞對白血病細(xì)胞是否有直接的增殖抑制作用。
　　 3.用淋巴細(xì)胞作效應(yīng)細(xì)胞、白血病細(xì)胞為靶細(xì)胞，并加入嗜酸性粒細(xì)胞混合培養(yǎng)，在15:1的效靶比下進(jìn)行白血病細(xì)胞增殖抑制實驗；并與不加嗜酸性粒細(xì)胞組比較。用CFSE標(biāo)記、FCM檢測，觀察嗜酸性粒細(xì)胞對淋巴細(xì)胞抑制白血病細(xì)胞增殖作用是否有影響。
　　 [結(jié)果]
　　 1.嗜酸性粒細(xì)胞單獨培養(yǎng)120h，使用新鮮培養(yǎng)液培養(yǎng)的嗜酸性粒細(xì)胞(對照組)存活率僅為19.7

3、％，而用Jurket、M2a、M3a及HL-60細(xì)胞的培養(yǎng)液上清培養(yǎng)的(實驗組)存活率分別為68.4％、74.1％、76.0％和86.7％。實驗組的嗜酸性粒細(xì)胞繼續(xù)培養(yǎng)至216h，收集細(xì)胞，涂片，DAPI染色，其細(xì)胞體積相對新鮮分離的變小，形態(tài)規(guī)則，嗜酸性顆粒及核染色質(zhì)比較完整；對照組培養(yǎng)120h，其細(xì)胞體積也變小，形態(tài)規(guī)則，顆粒清晰，但核染色質(zhì)已經(jīng)破碎。
　　 2.嗜酸性粒細(xì)胞和白血病細(xì)胞混合培養(yǎng)72h，在效靶比100:1的情

4、況下，白血病細(xì)胞依然形成克隆性增長。CFSE標(biāo)記的HL-60細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞混合培養(yǎng)72h，經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測。結(jié)果顯示，對照組和實驗組HL-60細(xì)胞的增殖指數(shù)分別為18.66±0.56、18.13±1.12兩者之間的差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
　　 3.CFSE標(biāo)記的HL-60細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞及淋巴細(xì)胞和混合培養(yǎng)72h，經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測。結(jié)果顯示，空白對照組、實驗對照組及實驗組HL-60細(xì)胞的增殖指數(shù)分別為18.6