壁虎醇提物抗宮頸癌SiHa細胞作用及其機制的研究.pdf

1、目的：本實驗旨在研究壁虎醇提物（GEE）對宮頸癌 SiHa細胞的抗腫瘤作用，并對其抗腫瘤機制進行初步探討。
　　方法：人宮頸癌 SiHa細胞，體外常規(guī)培養(yǎng)，用對數(shù)生長期 SiHa細胞進行后續(xù)實驗，實驗分為兩部分。（1）壁虎醇提物對SiHa細胞遷移及侵襲的影響：實驗劑量（不明顯抑制腫瘤細胞增殖的劑量）確定后，進行 SiHa細胞遷移實驗。實驗分為對照組和不同濃度（0.025、0.05、0.1 mg/mL GEE）壁虎醇提物實驗組。用不

2、同濃度的壁虎醇提物分別處理人宮頸癌SiHa細胞24 h后，通過劃痕實驗觀察壁虎醇提物對 SiHa細胞劃痕愈合能力的影響；Transwell小室遷移實驗及 Transwell小室侵襲實驗?zāi)Ｐ停謩e用來檢測壁虎醇提物處理后，SiHa細胞遷移及侵襲能力的改變；Western blot被用來檢測壁虎醇提物對SiHa細胞內(nèi)E鈣黏蛋白（E-cadherin）、血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）和 Rac1蛋白表達的影響。（2）壁虎醇提物對 SiHa細胞增

3、殖及凋亡的影響：不同濃度（0.1、0.2、0.3 mg/mL）壁虎醇提物處理 SiHa細胞后。分別通過 MTT實驗和克隆形成實驗評估壁虎醇提物體外對 Siha細胞增殖能力及克隆形成能力的影響；壁虎醇提物處理后，倒置顯微鏡下觀察SiHa細胞形態(tài)的變化；Hoechst33258染色法用來檢測SiHa細胞核形態(tài)學(xué)的變化；通過Western blot檢測壁虎醇提物對SiHa細胞內(nèi)蛋白表達的影響。
　　結(jié)果：（1）壁虎醇提物對 SiHa細胞

4、遷移及侵襲的影響：壁虎醇提物處理24 h后，0.025 mg/mL、0.05 mg/mL、0.1 mg/mL GEE實驗組SiHa細胞的增殖抑制率分別為1.5％、5.5%、7.3%。劃痕實驗結(jié)果顯示壁虎醇提物處理組SiHa細胞劃痕愈合能力減弱，壁虎醇提物濃度越高，劃痕愈合面積越小。Transwell小室實驗結(jié)果顯示，與對照組相比，隨著壁虎醇提物濃度的增加，穿透的 SiHa細胞數(shù)明顯減少，即壁虎醇提物能降低 SiHa細胞遷移及侵襲的能力。

5、壁虎醇提物處理后，SiHa細胞內(nèi)E-cadherin蛋白的表達增多，而VEGF和Rac1蛋白的表達相對減少。（2）壁虎醇提物對 SiHa細胞增殖及凋亡的影響：MTT結(jié)果顯示壁虎醇提物可顯著抑制 SiHa細胞的增殖，呈劑量和時間依賴性；壁虎醇提物處理SiHa細胞24 h、48 h、72 h后，IC50值分別為0.318 mg/mL、0.239 mg/mL、0.219 mg/mL；倒置顯微鏡下可觀察到SiHa細胞內(nèi)形態(tài)的變化，與對照組比較，

6、不同濃度壁虎醇提物(0.1、0.2、0.3 mg/mL)作用后的SiHa明顯皺縮，細胞數(shù)量減少，細胞膜的完整性受損，藥物濃度越高損傷越嚴重；熒光顯微鏡下觀察到SiHa細胞凋亡的典型形態(tài)學(xué)變化，SiHa細胞可見染色質(zhì)濃縮、細胞核分裂和體積減少等變化。Western blot結(jié)果顯示GEE可下調(diào)Bcl-2和VEGF蛋白的表達，反之，上調(diào)Bax、Cytochrome c(Cyt c)、caspase-9和caspase-3蛋白的表達。