鯊魚肝油的制備及其抗宮頸癌作用和機制的研究.pdf

1、目的：本研究論文主要從鯊魚肝油提取和鑒定、鯊魚肝油體內(nèi)對宮頸癌的抑制作用、毒副作用和代謝分布情況、鯊魚肝油體外對Hela細胞的抑制作用四個方面進行深入探究鯊魚肝油對宮頸癌生長的抑制作用。
　　方法：本論文采用堿浸提法、有機溶劑法和堿性蛋白酶法提取鯊魚肝油。改變提取工藝中液固比、酶加入量、反應(yīng)pH、時間和溫度等因素優(yōu)化提取工藝，促使鯊魚肝油得率最大。采用紅外光譜，氣相色譜和高效液相色譜法對所提取的鯊魚肝油中主要成分角鯊烯、烷氧基甘油

2、和維生素進行定性和定量分析。將制備的鯊魚肝油作用于U14宮頸癌荷瘤小鼠模型，連續(xù)灌胃給藥15天，第16天處死，檢測抑瘤率、胸腺脾臟指數(shù)、免疫細胞細胞因子和SOD、MDA水平。在給藥后0.5h，1h，2h，4h，8h，16h，24h分別收集小鼠血液、肝臟、腎臟和腫瘤組織，采用HPLC技術(shù)檢測鯊魚肝油主要成分在體內(nèi)的代謝和分布情況。小鼠灌服鯊魚肝油(大劑量)30天，眼球取血進行小鼠血常規(guī)和肝腎功能測定；將鯊魚肝油作用于HeLa細胞，采用MT

3、T和PI-Hoechst染色方法分別檢測鯊魚肝油對HeLa細胞生長及凋亡作用；利用流式細胞儀檢測鯊魚肝油對HeLa細胞周期的影響。
　　結(jié)果：四種鯊魚肝油提取方法中堿性蛋白酶法提取率最高，得率達到30.1％；將鯊魚肝油作用于荷瘤小鼠，高劑量組（600mg/kg）抑瘤率達到54.46%，且顯著增加小鼠血清和肝臟的SOD水平，上調(diào)IL-2/IL-4比率，提高脾臟指數(shù)；急性毒理實驗表明，試驗組和正常組小鼠比較，血常規(guī)幾乎沒有改變，肝功和

4、腎功沒有變化；HPLC檢測結(jié)果表明，角鯊烯和烷氧基甘油在體內(nèi)代謝半衰期分別為2h和1h，且角鯊烯在肝臟中分布較多，表明與肝臟具有較強的親和力，烷氧基甘油在腫瘤組織中分布較多，因此與腫瘤組織有較好的親和力；鯊魚肝油的體外實驗結(jié)果表明，鯊魚肝油（600μg/ml）作用HeLa細胞36h，生長抑制率達到75%，且對HEK293T細胞無明顯殺傷作用；PI和Hoechst染色結(jié)果表明，凋亡細胞和壞死比例明顯增多；流式細胞儀檢測發(fā)現(xiàn)G1期和G2細胞

5、比例分別從42.54%、4.32%上升到50.40%、13.65%，S期細胞比例從53.14%下降至35.95%。
　　結(jié)論：鯊魚肝油最佳提取工藝為：堿性蛋白酶法，液固比為2，酶用量為肝臟質(zhì)量的2%，反應(yīng)pH、時間和溫度分別為9、4h、48℃，鯊魚肝油最大得率為30.1%，提取的鯊魚肝油中角鯊烯含量為32.31%，烷氧基甘油含量為44.09%，維生素A含量為2.05%，共占鯊魚肝油總量的78.45%。鯊魚肝油能夠有效的抑制腫瘤生長