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文檔簡介
1、轉移相關基因1(metastasis-associated gene l,MTA1)是一個與腫瘤轉移相關、具有組蛋白脫乙?;钚缘幕?,通過改變組蛋白的乙?;癄顟B(tài)進而調控基因表達。本研究探討了MTA1基因的改變對宮頸癌惡性表型的影響。
(1)免疫組化研究我們用免疫組化法檢測了正常宮頸、宮頸癌以及轉移淋巴結組織中MTA1蛋白的表達水平。結果顯示,與正常宮頸上皮相比,宮頸癌與淋巴結轉移癌組織中MTA1陽性細胞數(shù)量及染色強度均明
2、顯增高。宮頸癌中MTA1蛋白的過表達發(fā)生率為64%,高于淋巴結轉移灶(47.62%)。正常宮頸中MTA1蛋白定位于細胞核;宮頸癌組織中MTA1則出現(xiàn)了細胞核/細胞漿/細胞膜的多種形式的蛋白定位,表明在腫瘤發(fā)生過程中存在MTA1表達和定位的紊亂。宮頸癌中MTA1蛋白的過表達與淋巴轉移、浸潤深度及脈管浸潤有關,與組織學類型、分化程度無關。相關性分析顯示MTA1蛋白與抑癌基因PTEN蛋白的表達呈負相關。Kaplan-Meier生存分析未提示M
3、TA1是宮頸癌的不良預后因素,需要擴大樣本進一步研究。
(2)細胞效應學實驗1)宮頸癌細胞系中,免疫熒光顯示Hela細胞中MTA1蛋白主要定位于細胞核,而CaSki細胞的胞核和胞漿均呈陽性表達。RT-PCR及Western blot顯示CaSki細胞中MTA1mRNA及蛋白表達高于Hela細胞。2)瞬時轉染MTA1-SiRNA入CaSki細胞,可見細胞生長減慢,克隆形成及劃痕愈合能力下降,但對細胞周期的改變不明顯。隨著干擾
4、濃度的增加、時間的延長,siRNA對MTA1 mRNA表達的抑制作用逐漸增強。3)RT-PCR、Western blotting、MTT、transwell及細胞粘附等方法顯示穩(wěn)定轉染MTA1表達質粒能促進CaSki細胞的生長、克隆形成及劃痕愈合能力,促進細胞的體外粘附、侵襲細胞外基質及體外遷移能力;RNA干擾質粒沉默MTA1基因表達則具有相反作用,但對細胞周期的改變不明顯。RT-PCR結果顯示MTA1基因表達水平的改變,能導致多個轉移
5、相關基因表達的改變,包括粘附分子、癌基因及抑癌基因等。
(3)動物實驗在建立的CaSki細胞裸鼠皮下成瘤模型中,轉染MTA1基因表達質粒的細胞體內成瘤能力增強,而轉染MTA1基因干擾質粒的細胞體內成瘤能力顯著下降,差異具有統(tǒng)計學意義。
本研究得出以下結論:宮頸癌組織中MTA1蛋白的表達明顯升高,與抑癌基因PTEN的表達呈負相關,與腫瘤的惡性生物學行為關系密切,其表達異常可能參與了宮頸癌的發(fā)生發(fā)展過程。MTA1
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