MTA1對(duì)子宮內(nèi)膜癌侵襲轉(zhuǎn)移能力的影響.pdf

1、目的:
　　轉(zhuǎn)移相關(guān)基因1(metastasis-associated-genel)MTA1是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的與腫瘤發(fā)生，侵襲及轉(zhuǎn)移密切相關(guān)的基因，通過(guò)參與細(xì)胞核重構(gòu)和脫乙?；鶑?fù)合物(nucleosomeremodelingandhistonedeaeetylase，NuRD)的組成，在細(xì)胞的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，染色質(zhì)重構(gòu)，及轉(zhuǎn)錄的過(guò)程中發(fā)揮其生物學(xué)效應(yīng)，進(jìn)一步影響癌細(xì)胞的侵襲及轉(zhuǎn)移能力。研究發(fā)現(xiàn)MTA1在肺癌、肝癌、胰腺癌、食管癌等多種惡性腫

2、瘤中呈現(xiàn)高表達(dá)，且與其侵襲轉(zhuǎn)移能力密切相關(guān)，但在子宮內(nèi)膜癌中的研究目前國(guó)內(nèi)外尚不多見(jiàn)，本研究通過(guò)研究不同子宮內(nèi)膜組織中MTA1表達(dá)差異，通過(guò)siRNA(小干擾RNA)抑制MTA1在子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系HEC-1-A中的表達(dá)，初步探討MTA1在子宮內(nèi)膜癌發(fā)生及侵襲轉(zhuǎn)移過(guò)程中的作用，為子宮內(nèi)膜癌的基因治療提供新的靶點(diǎn)及理論依據(jù)。
　　方法:
　　1.采用免疫組織化學(xué)SP法檢測(cè)449例子宮內(nèi)膜組織中MTA1的表達(dá)水平，其中正常子宮內(nèi)膜

3、組織100例，不典型增生子宮內(nèi)膜組織49例，子宮內(nèi)膜癌組織300例，卡方檢驗(yàn)分析比較此三組MTA1表達(dá)水平差異，分析MTA1表達(dá)水平與子宮內(nèi)膜癌分化程度、臨床分期、肌層浸潤(rùn)深度的關(guān)系。
　　2.通過(guò)脂質(zhì)體介導(dǎo)方法，將特異性siRNA表達(dá)載體psilencer2.0-MTA1-siRNA轉(zhuǎn)染入人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系HEC-1-A，以轉(zhuǎn)染無(wú)關(guān)序列組psilencer2.0-neg及未轉(zhuǎn)染組(non-transfected)做對(duì)照，將各組細(xì)

4、胞進(jìn)行常規(guī)培養(yǎng)。
　　3.采用RT-PCR以及western-blot檢測(cè)特異性siRNA對(duì)MTA1基因mRNA及蛋白表達(dá)的抑制效果。
　　4.應(yīng)用劃痕損傷實(shí)驗(yàn)及transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)MTA1對(duì)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移能力的影響，以及驗(yàn)證體外應(yīng)用RNA干擾技術(shù)以MTA1為靶點(diǎn)抑制子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞侵襲及轉(zhuǎn)移的可行性。
　　結(jié)果:
　　1.MTA1在正常子宮內(nèi)膜，不典型增生子宮內(nèi)膜及子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)水平存在明顯

5、差異，在癌組織中呈現(xiàn)顯著的過(guò)表達(dá)，且與子宮內(nèi)膜癌不同的組織學(xué)分級(jí)負(fù)相關(guān)，與不同的肌層浸潤(rùn)深度及臨床分期中呈現(xiàn)正相關(guān)，且組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　2.RT-PCR結(jié)果顯示，沉默MTA1基因后，其mRNA的水平顯著降低，說(shuō)明特異性的siRNA成功抑制了MTA1的轉(zhuǎn)錄，阻斷了其mRNA的表達(dá)；western-blot結(jié)果顯示，沉默MTA1基因后，其蛋白的水平顯著降低，說(shuō)明特異性的siRNA成功抑制了MTA1的翻譯，阻斷了其蛋白的表達(dá)。

6、
　　3.劃痕損傷實(shí)驗(yàn)顯示轉(zhuǎn)染后劃痕損傷愈合明顯減慢，遷移率明顯降低，transwell體外侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)染后穿膜細(xì)胞百分率顯著降。
　　結(jié)論:
　　1.MTA1表達(dá)水平的增高與子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生、分化程度、臨床分期及肌層浸潤(rùn)深度密切相關(guān)，可能在其發(fā)生發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮著重要作用，有望成為預(yù)測(cè)子宮內(nèi)膜癌發(fā)生及浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移的有效生物學(xué)標(biāo)志，為子宮內(nèi)膜癌的診斷及治療提供依據(jù)。
　　2.體外實(shí)驗(yàn)顯示，應(yīng)用脂質(zhì)體介導(dǎo)的RNA