ATAD2基因?qū)m頸癌增殖和侵襲遷移能力影響的相關(guān)研究.pdf

1、目的：
　　本研究旨在探討ATAD2在宮頸癌組織和細(xì)胞株中的表達(dá)情況及與宮頸癌發(fā)生發(fā)展、侵襲轉(zhuǎn)移的關(guān)系，為臨床治療提供新的思路及依據(jù)。研究的第一部分，在組織和細(xì)胞水平上檢測ATAD2的表達(dá)水平，分析其與臨床病理學(xué)特征的關(guān)系;研究的第二部分，通過RNAi技術(shù)下調(diào)ATAD2表達(dá)的宮頸癌細(xì)胞株，觀察對其增殖、凋亡和細(xì)胞周期的影響;研究的第三部分，通過RNAi技術(shù)下調(diào)ATAD2表達(dá)的宮頸癌細(xì)胞株，觀察對其遷移、侵襲能力的影響，揭示ATAD

2、2與宮頸癌發(fā)生發(fā)展、侵襲轉(zhuǎn)移的關(guān)系，探討ATAD2潛在的臨床應(yīng)用價(jià)值。
　　方法：
　　1、實(shí)驗(yàn)對象
　　中國醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院接受治療的患者，宮頸癌組織標(biāo)本135例、CIN組織標(biāo)本60例。30例宮頸癌新鮮組織標(biāo)本和30例癌旁正常宮頸組織采自于手術(shù)切除30分鐘內(nèi)。全部患者均知情同意并經(jīng)中國醫(yī)科大學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)。正常宮頸細(xì)胞株，宮頸癌細(xì)胞株HeLa、SiHa，C33a。
　　2、實(shí)驗(yàn)方法
　　(1)免疫組

3、織化學(xué)檢測135例宮頸癌、60例宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變、30例正常宮頸組織中ATAD2蛋白表達(dá)。
　　(2)Western Blot檢測ATAD2蛋白在30例宮頸癌癌組織和30例配對癌旁組織中的表達(dá)。
　　(3)細(xì)胞培養(yǎng):宮頸癌細(xì)胞株常規(guī)培養(yǎng)。
　　(4)免疫熒光檢測ATAD2在HeLa、SiHa細(xì)胞中的定位。
　　(5)應(yīng)用RNAi技術(shù)下調(diào)靶基因ATAD2的表達(dá)。
　　(6)應(yīng)用平板克隆實(shí)驗(yàn)檢測ATAD2表達(dá)

4、下調(diào)后，HeLa、SiHa細(xì)胞克隆形成能力的變化。
　　(7)應(yīng)用CCK8檢測ATAD2表達(dá)下調(diào)后，HeLa、SiHa細(xì)胞增殖能力的變化。
　　(8)應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測ATAD2表達(dá)下調(diào)后，HeLa、SiHa細(xì)胞周期和凋亡情況的變化。
　　(9)應(yīng)用Transwell實(shí)驗(yàn)檢測ATAD2表達(dá)下調(diào)后，HeLa、SiHa細(xì)胞侵襲能力的變化。
　　(10)應(yīng)用細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測ATAD2表達(dá)下調(diào)后，HeLa、SiHa細(xì)胞遷

5、移能力的變化。
　　結(jié)果：
　　1、ATAD2在宮頸癌中的表達(dá)
　　(1)免疫組化檢測結(jié)果說明宮頸癌組織ATAD2表達(dá)水平與正常宮頸組織比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05);結(jié)合臨床資料進(jìn)一步研究表明ATAD2高表達(dá)與腫瘤分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)(P＜0.05)。
　　(2)Western Blot結(jié)果顯示，ATAD2在宮頸癌組織中的表達(dá)水平高于癌旁正常宮頸組織(P＜0.05)，進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)顯示ATAD2在宮頸癌細(xì)胞株

6、HeLa和SiHa中表達(dá)顯著升高。
　　2、ATAD2基因表達(dá)下調(diào)后對宮頸癌細(xì)胞增殖、凋亡和細(xì)胞周期的影響
　　(1)選取ATAD2高表達(dá)的人宮頸癌細(xì)胞株HeLa和SiHa，免疫熒光結(jié)果顯示ATAD2蛋白于細(xì)胞核、胞漿中皆有表達(dá)。
　　(2)下調(diào)ATAD2基因表達(dá)后，平板克隆實(shí)驗(yàn)及CCK8檢測結(jié)果表明HeLa和SiHa細(xì)胞克隆形成能力和增殖能力下降，細(xì)胞周期實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示HeLa和SiHa細(xì)胞周期阻滯于G1/S期，細(xì)胞凋

7、亡能力提高。
　　3、ATAD2基因表達(dá)下調(diào)后對宮頸癌細(xì)胞侵襲、遷移能力的影響
　　(1)沉默表達(dá)ATAD2基因，Transwell實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，HeLa和SiHa細(xì)胞侵襲能力下降。
　　(2)沉默表達(dá)ATAD2基因，細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，HeLa和SiHa細(xì)胞遷移能力下降。
　　結(jié)論：
　　1.ATAD2基因在宮頸癌組織及細(xì)胞中呈高表達(dá)，且與腫瘤分期等臨床病理特征密切相關(guān)。
　　2.下調(diào)ATAD2基