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文檔簡介
1、目的:探討Par3蛋白在宮頸癌中的表達(dá)以及對宮頸癌細(xì)胞增殖與轉(zhuǎn)移的作用。
方法:通過免疫組織化學(xué)方法檢測Par3蛋白在89例宮頸鱗癌中的表達(dá)水平。采用實時熒光定量PCR檢測PARD3在HPV陽性宮頸癌SiHa細(xì)胞和HPV陰性宮頸癌C33A細(xì)胞中的本底表達(dá)。采用基因過表達(dá)和RNA干擾技術(shù)轉(zhuǎn)染宮頸癌細(xì)胞系。運用實時熒光定量PCR和蛋白印跡技術(shù)檢測PARD3 mRNA和Par3蛋白水平變化。Transwell小室體外實驗檢測其對Si
2、Ha細(xì)胞侵襲、遷移能力的影響。流失細(xì)胞術(shù)研究其對SiHa細(xì)胞周期及凋亡的影響。
結(jié)果:實時熒光定量PCR檢測PARD3基因在SiHa和C33A細(xì)胞中的表達(dá)差異無統(tǒng)計學(xué)意義。免疫組化實驗顯示Par3蛋白在正常宮頸組織強(qiáng)表達(dá),宮頸鱗癌組織中弱表達(dá)。QRT-PCR和Western blot檢測提示SiHa細(xì)胞轉(zhuǎn)染基因PARD3過表達(dá)質(zhì)粒后mRNA和蛋白質(zhì)表達(dá)水平顯著增高,PARD3siRNA干擾SiHa細(xì)胞后PARD3 mRNA和蛋
3、白表達(dá)水平顯著降低;Par3蛋白低表達(dá)誘導(dǎo)了EMT相關(guān)基因(N-cadherin,E-cadherin andβ-Catenin)的表達(dá)變化;Transwell小室體外實驗表明Par3過表達(dá)組細(xì)胞侵襲、遷移能力明顯低于對照組(P<0.05),而低表達(dá)組(干擾組)細(xì)胞侵襲、遷移能力明顯高于對照組(P<0.01);流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示與空白對照相比,PARD3基因被干擾后細(xì)胞被阻滯在S期,干擾組細(xì)胞凋亡率明顯降低(P<0.01);然而,上調(diào)P
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