極性蛋白Par3對(duì)宮頸癌細(xì)胞增殖、侵襲和遷移作用研究.pdf

1、目的:探討Par3蛋白在宮頸癌中的表達(dá)以及對(duì)宮頸癌細(xì)胞增殖與轉(zhuǎn)移的作用。
　　方法:通過免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)Par3蛋白在89例宮頸鱗癌中的表達(dá)水平。采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)PARD3在HPV陽(yáng)性宮頸癌SiHa細(xì)胞和HPV陰性宮頸癌C33A細(xì)胞中的本底表達(dá)。采用基因過表達(dá)和RNA干擾技術(shù)轉(zhuǎn)染宮頸癌細(xì)胞系。運(yùn)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR和蛋白印跡技術(shù)檢測(cè)PARD3 mRNA和Par3蛋白水平變化。Transwell小室體外實(shí)驗(yàn)檢測(cè)其對(duì)Si

2、Ha細(xì)胞侵襲、遷移能力的影響。流失細(xì)胞術(shù)研究其對(duì)SiHa細(xì)胞周期及凋亡的影響。
　　結(jié)果:實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)PARD3基因在SiHa和C33A細(xì)胞中的表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。免疫組化實(shí)驗(yàn)顯示Par3蛋白在正常宮頸組織強(qiáng)表達(dá)，宮頸鱗癌組織中弱表達(dá)。QRT-PCR和Western blot檢測(cè)提示SiHa細(xì)胞轉(zhuǎn)染基因PARD3過表達(dá)質(zhì)粒后mRNA和蛋白質(zhì)表達(dá)水平顯著增高，PARD3siRNA干擾SiHa細(xì)胞后PARD3 mRNA和蛋

3、白表達(dá)水平顯著降低；Par3蛋白低表達(dá)誘導(dǎo)了EMT相關(guān)基因(N-cadherin,E-cadherin andβ-Catenin)的表達(dá)變化；Transwell小室體外實(shí)驗(yàn)表明Par3過表達(dá)組細(xì)胞侵襲、遷移能力明顯低于對(duì)照組（P<0.05），而低表達(dá)組（干擾組）細(xì)胞侵襲、遷移能力明顯高于對(duì)照組（P<0.01）；流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示與空白對(duì)照相比，PARD3基因被干擾后細(xì)胞被阻滯在S期，干擾組細(xì)胞凋亡率明顯降低（P<0.01）；然而，上調(diào)P