溶血磷脂酸對(duì)胃癌細(xì)胞的增殖遷移作用及其信號(hào)通路.pdf

1、目的：研究溶血磷脂酸(Lysophosphatidicacid，LPA)對(duì)胃癌的發(fā)生和遷移的作用，并闡明其受體介導(dǎo)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)理，為研究胃癌發(fā)病機(jī)制提供新的思路和理論依據(jù)。
　　內(nèi)容：用LPA和LPC分別刺激胃癌細(xì)胞BGC-803，對(duì)照中分別加入LPA受體特異性拮抗劑Ki16425和Gi蛋白特異性抑制劑PTX及ERK抑制劑PD98059，用MTT比色法觀察胃癌細(xì)胞BGC-803增殖，用Boydenchamber測(cè)定細(xì)胞遷移作用。蛋白

2、印跡技術(shù)檢測(cè)LPA、LPC對(duì)胃癌組織和細(xì)胞中ERK1/2的磷酸化作用，對(duì)照為Ki16425和PTX的抑制作用，從而確定LPA作用于胃癌細(xì)胞的信號(hào)通路。采用免疫組化技術(shù)分析胃癌組織中Autotaxin表達(dá)，采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)分析Autotaxin及LPA受體基因的表達(dá)量，用檢測(cè)酶產(chǎn)物吸光度值的方法檢測(cè)Autotaxin的酶活性，通過(guò)RNA干擾實(shí)驗(yàn)確定Autotaxin對(duì)LPC-LPA過(guò)程的的影響。
　　結(jié)果：MTT檢測(cè)結(jié)果顯

3、示LPA、LPC均能促進(jìn)BGC-803細(xì)胞增殖與遷移，且Ki16425和PTX均能抑制它們的增殖作用。熒光定量RT-PCR結(jié)果表明，在BGC-803細(xì)胞中，LPA1-4四個(gè)受體均有表達(dá)，其中LPA1受體的表達(dá)量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于其它幾個(gè)受體。蛋白印跡實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，用LPA、LPC和EGF單獨(dú)刺激BGC-803細(xì)胞均能使ERK1/2信號(hào)通路活化。與Ki16425同時(shí)作用和PTX預(yù)處理BGC-803細(xì)胞時(shí)，LPA和LPC誘導(dǎo)的p-ERK1/2水平明顯

4、降低，而EGF誘導(dǎo)的ERK1/2磷酸化水平未受影響。Autotaxin基因在胃癌組織和細(xì)胞中大量表達(dá)，并且顯示出很高的磷脂酶D活性，使LPC轉(zhuǎn)化為L(zhǎng)PA。siRNA干擾ATX基因的表達(dá)，將會(huì)抑制LPC刺激的BGC-803細(xì)胞的增殖和遷移作用。
　　結(jié)論：1.ATX在胃癌細(xì)胞和組織中均有高表達(dá)，并有很高的磷脂酶D的活性。2.LPA在細(xì)胞外的主要來(lái)源是:由ATX水解LPC后產(chǎn)生LPA。3.胃癌細(xì)胞BGC-803中LPA促細(xì)胞增殖和遷移