溶血磷脂酸對胃癌細胞的增殖遷移作用及其信號通路.pdf

1、目的：研究溶血磷脂酸(Lysophosphatidicacid，LPA)對胃癌的發(fā)生和遷移的作用，并闡明其受體介導(dǎo)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機理，為研究胃癌發(fā)病機制提供新的思路和理論依據(jù)。
　　內(nèi)容：用LPA和LPC分別刺激胃癌細胞BGC-803，對照中分別加入LPA受體特異性拮抗劑Ki16425和Gi蛋白特異性抑制劑PTX及ERK抑制劑PD98059，用MTT比色法觀察胃癌細胞BGC-803增殖，用Boydenchamber測定細胞遷移作用。蛋白

2、印跡技術(shù)檢測LPA、LPC對胃癌組織和細胞中ERK1/2的磷酸化作用，對照為Ki16425和PTX的抑制作用，從而確定LPA作用于胃癌細胞的信號通路。采用免疫組化技術(shù)分析胃癌組織中Autotaxin表達，采用實時熒光定量PCR技術(shù)分析Autotaxin及LPA受體基因的表達量，用檢測酶產(chǎn)物吸光度值的方法檢測Autotaxin的酶活性，通過RNA干擾實驗確定Autotaxin對LPC-LPA過程的的影響。
　　結(jié)果：MTT檢測結(jié)果顯

3、示LPA、LPC均能促進BGC-803細胞增殖與遷移，且Ki16425和PTX均能抑制它們的增殖作用。熒光定量RT-PCR結(jié)果表明，在BGC-803細胞中，LPA1-4四個受體均有表達，其中LPA1受體的表達量遠遠高于其它幾個受體。蛋白印跡實驗結(jié)果表明，用LPA、LPC和EGF單獨刺激BGC-803細胞均能使ERK1/2信號通路活化。與Ki16425同時作用和PTX預(yù)處理BGC-803細胞時，LPA和LPC誘導(dǎo)的p-ERK1/2水平明顯

4、降低，而EGF誘導(dǎo)的ERK1/2磷酸化水平未受影響。Autotaxin基因在胃癌組織和細胞中大量表達，并且顯示出很高的磷脂酶D活性，使LPC轉(zhuǎn)化為LPA。siRNA干擾ATX基因的表達，將會抑制LPC刺激的BGC-803細胞的增殖和遷移作用。
　　結(jié)論：1.ATX在胃癌細胞和組織中均有高表達，并有很高的磷脂酶D的活性。2.LPA在細胞外的主要來源是:由ATX水解LPC后產(chǎn)生LPA。3.胃癌細胞BGC-803中LPA促細胞增殖和遷移