溶血磷脂酸在內(nèi)皮祖細(xì)胞移殖治療急性肺損傷大鼠中的作用研究.pdf

1、目標(biāo):探討LPS引發(fā)的大鼠急性肺損傷(acute lung injury ALI)，給予經(jīng)溶血磷脂酸(lysophosphatidic acid，LPA)預(yù)處理內(nèi)皮祖細(xì)胞移殖治療的效果，探究LPA對EPCs的存活及遷移活性的改善作用，提高EPCs移殖治療ALI的效果，為生物學(xué)提供基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。
　　方法:制建ALI模型，選用密度梯度的離心方法，單核細(xì)胞，經(jīng)SD大鼠的骨髓中分離，得到內(nèi)皮祖細(xì)胞，用DMEM-F12培養(yǎng)基（含20％優(yōu)良

2、胎牛血清及生長因子）誘導(dǎo)培育;體外分離、培養(yǎng)的內(nèi)皮祖細(xì)胞，經(jīng)LPA預(yù)處理，察看EPCs的增值活性在體外受LPA影響情況。進(jìn)一步，經(jīng)LPA過夜處理EPCs后，LPS誘導(dǎo)尾靜脈注射的內(nèi)皮祖細(xì)胞移殖，LPS+熒光標(biāo)記的內(nèi)皮祖細(xì)胞懸液，注入急性肺損傷模型大鼠體內(nèi)，觀察經(jīng)LPA處理后的內(nèi)皮祖細(xì)胞的移殖，治療大鼠急性肺損傷的作用。大鼠隨機(jī)分為4組:正常對照組、LPS對照組（LPS+PBS組）、內(nèi)皮祖細(xì)胞對照組（LPS+EPCs組）、治療組（LPS+

3、EPCs+LPA組），大鼠ALI模型的建制，LPS誘導(dǎo)，方法靜脈給藥，LPS+內(nèi)皮祖細(xì)胞移殖組，熒光標(biāo)識的EPCs懸液(EPCs2×106/0.5ml)，注入靜脈于ALI模型中，治療組（LPS+EPCs+LPA組）經(jīng)LPA預(yù)處理的EPCs注射于ALI模型大鼠尾靜脈。分別于移殖后1、7天取肺組織，選用HE染色評價病理改變;肺組織的干/濕比值(W/D)檢測，選用實(shí)時熒光PCR方法，檢測TLR4mRNA、NF-KBmRNA的表達(dá)情況，在肺組織

4、中。
　　結(jié)果:成功分離、培養(yǎng)EPCs; LPA能夠促進(jìn)EPCs的增殖， EPCs移植ALI大鼠結(jié)果顯示，EPCs移殖可減輕急性肺損傷大鼠肺炎癥細(xì)胞的浸潤、細(xì)胞損傷，降低組織的W/D比值;EPCs經(jīng)LPA預(yù)處理，大鼠外周血中內(nèi)皮祖細(xì)胞的含量可顯著提高;同時TLR4 mRNA、NF-KBmRNA的表達(dá)在肺組織被下調(diào)，LPA預(yù)處理EPCs組相比單純EPCs移殖組明顯減少炎癥細(xì)胞在急性肺損傷大鼠肺結(jié)構(gòu)的浸潤、細(xì)胞損傷，下降肺組織的W/D

5、比值;TLR4 mRNA、NF-KBmRNA的表達(dá)在肺組織被下調(diào)(p＜0.001)。
　　結(jié)論:1、選用密度梯度的離心方法，經(jīng)大鼠的骨髓分離，培育了EPCs在體外;2、LPA預(yù)處理EPCs靜脈移殖后能成功到達(dá)損傷大鼠的肺組織。3.LPA預(yù)處理EPCs移殖可緩解LPS誘導(dǎo)的急性肺損傷，修復(fù)了損傷的血管從而通過減少炎性細(xì)胞滲出和粘附，減輕了炎癥應(yīng)答;通過調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞，下調(diào)了促炎癥反應(yīng)的應(yīng)答，使機(jī)體恢復(fù)促炎—抗炎平衡。4.LPA促使EP