內(nèi)皮祖細(xì)胞對兔急性肺損傷炎癥因子的影響.pdf

1、背景:
　　 長期以來，人們雖然對急性肺損傷(acute lung injury，ALI)/急性呼吸窘迫綜合征(acute respiratory distress syndrome，ARDS)進(jìn)行大量的基礎(chǔ)和臨床研究，但治療一直沒有取得大的突破，主要還是治療原發(fā)病，根據(jù)其病理生理改變和臨床表現(xiàn)，進(jìn)行針對性和支持性治療，目前ALI/ARDS的病死率仍高達(dá)50％～60％[1]。肺部炎癥反應(yīng)是ALI/ARDS的主要特征，細(xì)胞因子在其

2、發(fā)病機(jī)制中起著重要作用。其中TNF-α[2]、IL-1作用較為重要，被稱為前炎癥細(xì)胞因子，啟動、級聯(lián)和擴(kuò)大炎癥效應(yīng)，加重肺損傷。
　　 內(nèi)皮祖細(xì)胞(EPCs)是一種由骨髓產(chǎn)生的特異性前體細(xì)胞，在機(jī)體創(chuàng)傷、應(yīng)激、炎癥等刺激下，可以動員、遷移、歸巢至損傷部位，旁分泌、自分泌特定的細(xì)胞因子，分化成為成熟的內(nèi)皮細(xì)胞，促進(jìn)新生血管的生成，以利于機(jī)體損傷的修復(fù)、愈合。目前內(nèi)皮祖細(xì)胞在心血管疾病和組織工程領(lǐng)域已有較大應(yīng)用，而且已有實(shí)驗(yàn)證實(shí)炎癥

3、反應(yīng)時內(nèi)皮祖細(xì)胞外周血高表達(dá)，同時炎癥損傷部位可見內(nèi)皮祖細(xì)胞的增值、分化。
　　 目的:
　　 通過將同源同種外周血培養(yǎng)的內(nèi)皮祖細(xì)胞輸注到乳化油酸誘導(dǎo)的急性肺損傷兔模型中，檢測不同組別中兔肺組織TNF-a、IL-1的表達(dá)差異，來初步評估內(nèi)皮祖細(xì)胞對兔急性肺損傷中炎癥因子的影響。
　　 方法:
　　 實(shí)驗(yàn)部分一:經(jīng)新西蘭大白兔耳中央動脈抽取外周血，通過密度梯度離心法提取單形核細(xì)胞層，接種六孔板予EGM-2培

4、養(yǎng)液培養(yǎng);培養(yǎng)過程中在第7天時提取部分細(xì)胞用Dil-ac-LOL和FITC-UEA21雙熒光染色鑒定，證實(shí)細(xì)胞為分化中的內(nèi)皮祖細(xì)胞。
　　 實(shí)驗(yàn)部分二:體重為2.5～3 kg的雄性新西蘭大白兔30只，經(jīng)隨機(jī)數(shù)字表隨機(jī)分配為3組。
　　 1.組一:實(shí)驗(yàn)組:經(jīng)兔耳緣靜脈注射20％乳化油酸(0.3ml/kg)，20分鐘內(nèi)注射完畢并觀察動物的呼吸變化。穩(wěn)定30分鐘后予血?dú)夥治鲅鹾现笖?shù)＜300確認(rèn)急性肺損傷模型建立。注射20％乳化

5、油酸完畢60分鐘，經(jīng)兔耳緣靜脈輸注EPCs105/0.5mlPBS液。兔繼續(xù)飼養(yǎng)48小時然后處死，肺動脈、肺組織被取出。
　　 2.組二:對照組:經(jīng)兔耳緣靜脈注射20％乳化油酸(0.3ml/kg)，20分鐘內(nèi)注射完畢并觀察動物的呼吸變化。穩(wěn)定30分鐘后予血?dú)夥治鲅鹾现笖?shù)＜300確認(rèn)急性肺損傷模型建立。注射20％乳化油酸完畢60分鐘，經(jīng)兔耳緣靜脈輸注0.5ml空白PBS液。兔繼續(xù)飼養(yǎng)48小時然后處死，肺動脈、肺組織被取出。

6、　　 3.組三:空白組:經(jīng)兔耳緣靜脈注射生理鹽水乳化液(0.3ml/kg)，20分鐘內(nèi)注射完畢并觀察動物的呼吸變化。穩(wěn)定30分鐘后予血?dú)夥治稣７秶?。注射生理鹽水乳化液完畢60分鐘，經(jīng)兔耳緣靜脈輸注0.5ml空白PBS液。兔繼續(xù)飼養(yǎng)48小時然后處死，肺動脈、肺組織被取出。
　　 實(shí)驗(yàn)部分三:將實(shí)驗(yàn)組、對照組、空白組標(biāo)本石蠟包埋后提取蛋白樣品，經(jīng)Western blot方法測定TNF-α、IL-1。
　　 結(jié)果: