溶血磷脂酸在結(jié)腸癌細胞中的轉(zhuǎn)移及抗凋亡機制研究.pdf

1、目的:1、腫瘤轉(zhuǎn)移侵襲機制存在很多假說,公認的有解剖和機械學說、種子和土壤學說、腫瘤干細胞學說,而目前研究較為熱門的為上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(Epithelial-to-mesenchymal transition,EMT)學說。細胞發(fā)生EMT后遷移能力增加,有研究表明EMT在腫瘤侵襲及轉(zhuǎn)移中起著關(guān)鍵作用。本研究探討溶血磷脂酸(LPA)協(xié)助轉(zhuǎn)化生長因子1(TGFβ1)的促EMT作用;2、目前大部分化療藥物均為誘導細胞發(fā)生凋亡,有研究證明LPA能逆

2、轉(zhuǎn)化療藥物的促凋亡作用,本研究在于探討LPA能否拮抗5-氟尿嘧啶及奧沙利鉑的誘導的結(jié)腸癌細胞凋亡及探討其機制。
　　材料及方法:體外培養(yǎng)人結(jié)腸癌細胞SW480、HT-29;運用TGFβ1及LPA誘導SW480細胞,發(fā)生形態(tài)改變;用Western blotting蛋白免疫印記技術(shù)分析EMT分子標志物E-Cadherin、Vimentin的表達改變;采用MTS比色法檢測細胞增殖活性;用流式細胞術(shù)(FCM)分析LPA對5-氟尿嘧啶(5-

3、Fu)、奧沙利鉑(LOHP)誘導HT-29細胞凋亡及細胞周期的影響;用Western blotting檢測LPA及凋亡誘導劑處理前后細胞中凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2、Bax、Cleaved Caspase-3的表達差異。
　　結(jié)果:
　　(1)TGFβ1及LPA單獨誘導組均能使SW480細胞形態(tài)發(fā)生EMT改變;聯(lián)合誘導組細胞EMT改變更為明顯。
　　(2)在正常血清對照組、1％FBS空白對照組、LPA組、TGFβ1組、LP

4、A組+TGFβ1組,細胞內(nèi)E-Cadherin表達依次下降;Vimentin表達未見明顯差異。
　　(3)5-Fu、LOHP均可誘導HT-29細胞發(fā)生凋亡及細胞周期G0-G1期阻滯,對其生長抑制作用呈量效和時效關(guān)系。LPA能減少5-Fu、LOHP誘導的細胞凋亡,降低S期的比例。
　　(4)Western blotting檢測表明,空白對照組、5-Fu+LPA組、5-Fu組細胞中的Bax及Cleaved Caspase-3表達

5、量依次增加;5-Fu+LPA組、5-Fu組、空白對照組細胞中的Bcl-2表達量依次減少;空白對照組、LOHP+LPA組、LOHP組細胞中的Bax及CleavedCaspase-3表達量依次增加;LOHP+LPA組、LOHP組、空白對照組細胞中的Bcl-2表達量依次減少。
　　結(jié)論:
　　1、LPA可協(xié)助TGF-β1產(chǎn)生EMT作用。提示可通過下調(diào)LPA的表達或特異性阻斷LPA受體而抑制腫瘤侵襲及轉(zhuǎn)移。
　　2、LPA能逆