C-Flip蛋白在TRAIL誘導的結(jié)腸癌細胞凋亡中的作用及機制初探.pdf

1、目的： (1)觀察腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體(TRAIL)對結(jié)腸癌細胞株SW480，HT29，HCT116的不同敏感性及三株結(jié)腸癌細胞c-Flip蛋白的基礎表達水平。 (2)探討P13K/Akt信號通路在TRAIL誘導結(jié)腸癌細胞c-Flip表達過程中的作用，揭示結(jié)腸癌細胞對TRAIL敏感性發(fā)生改變的部分機制。 方法：以結(jié)腸癌細胞株SW480，HT29，HCT116為研究對象。 (1)用MTT法和流式細胞

2、術檢測不同時間(0，6，12，24，48h)和不同濃度(0，25，50，100ng/ml)的TRAIL對這3株細胞的凋亡率的影響(其中流式細胞術檢測100ng/ml TRAIL作用48小時的細胞凋亡率)。 (2)Western blot檢測三株細胞中c-Flip蛋白的表達水平。 (3)根據(jù)細胞株對TRAIL的不同敏感性以及c-Flip蛋白的表達水平，選取相對不敏感細胞株HT29進行下一步實驗，將其分為空白組；加入TRAI

3、L(100ng/ml)組；以及用特異性抑制劑ly294002預處理后加入TRAIL(100ng/ml)組。用流式細胞術分別檢測3組細胞凋亡率的變化，并用Western blot檢測c-Flip蛋白表達的變化情況。 (4)用100ng/ml TRAIL分別刺激HT29細胞不同時間(0，15，30，60，120min)后，Western blot檢測磷酸化Akt表達水平的變化。 結(jié)果： (1)SW480和HCT116

4、對TRAIL相對敏感，且呈時間劑量依賴性，而HT29相對不敏感。 (2)C-Flip蛋白在三株細胞中的表達水平不同，且可能與它們對TRAIL的不同敏感性有關。 (3)將HT29細胞分為3組(分別為空白組，100ng/ml TRAIL組，ly294002+100ng/mlTRAIL組)進行處理，結(jié)果顯示ly294002預處理組的c-Flip蛋白表達水平明顯降低，流式細胞術檢測發(fā)現(xiàn)ly294002預處理組的凋亡率明顯增加。

5、 (4)HT29細胞的p-Akt的基礎表達水平較高，100ng/ml TRAIL作用HT29細胞15，30，60，120min后，p-Akt蛋白的表達明顯降低，但各組間的p-Akt表達無明顯差異。 結(jié)論： (1)不同結(jié)腸癌細胞株對TRAIL有不同的敏感性：SW480和HCT116對TRAIL相對敏感，而HT29相對不敏感。 (2)通過P13K/Akt通路可下調(diào)c-Flip的表達，并使結(jié)腸癌細胞HT29對TR