溶血磷脂酸對(duì)肝癌細(xì)胞遷移的影響及其相關(guān)機(jī)理研究.pdf

1、肝癌作為全球范圍內(nèi)最常見的癌癥之一，其發(fā)病率和死亡率在惡性腫瘤中分別位居第五位和第二位。近年來(lái)，肝癌的發(fā)病率在全球范圍內(nèi)不斷增加，每年大約有70萬(wàn)人死于肝癌。目前肝癌的治療方式有手術(shù)切除、放射治療和化學(xué)藥物治療等，但這些治療方法仍然不能阻止肝癌的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，如何更好的預(yù)防和治療肝癌仍然是臨床上面臨的難題。
　　溶血磷脂酸（lysophosphatidic acid, LPA）是一種廣泛存在的生物活性磷脂，參與調(diào)節(jié)細(xì)胞的多種生理和病

2、理過(guò)程。研究發(fā)現(xiàn)癌變組織中LPA的含量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于正常組織，并參與了癌癥的發(fā)生和發(fā)展過(guò)程。LPA與腫瘤細(xì)胞運(yùn)動(dòng)能力的變化密切相關(guān)，而腫瘤細(xì)胞運(yùn)動(dòng)能力的改變是癌癥惡化和轉(zhuǎn)移的前提條件。因此，探究LPA對(duì)腫瘤細(xì)胞遷移的影響及其相關(guān)機(jī)理具有十分重要的意義。
　　已經(jīng)有研究報(bào)道了LPA對(duì)多種腫瘤細(xì)胞遷移能力的影響，但由于腫瘤細(xì)胞種類繁雜，LPA對(duì)腫瘤細(xì)胞遷移的影響呈現(xiàn)出一定的組織/細(xì)胞特異性。目前， LPA對(duì)肝癌細(xì)胞遷移行為的影響特征及分子機(jī)

3、制，人們還缺乏深入認(rèn)識(shí)。為此，本課題主要探討了LPA對(duì)肝癌細(xì)胞遷移能力的影響及其相關(guān)機(jī)理。主要研究?jī)?nèi)容和結(jié)果如下：
　　① LPA對(duì)肝癌細(xì)胞MHCC97H和HepG2遷移行為的影響
　　采用Transwell法分別考察了LPA對(duì)高轉(zhuǎn)移肝癌細(xì)胞MHCC97H和低轉(zhuǎn)移肝癌細(xì)胞HepG2遷移行為的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，LPA能夠明顯促進(jìn)MHCC97H細(xì)胞的遷移行為，并在一定濃度范圍內(nèi)呈現(xiàn)劑量相關(guān)性。LPA對(duì)HepG2細(xì)胞的遷移行為沒有明

4、顯的影響。
　?、?LPA受體（LPAR）在LPA促肝癌細(xì)胞遷移中的作用
　　為了探明兩種肝癌細(xì)胞遷移行為響應(yīng)LPA出現(xiàn)差異的原因，采用RT-PCR技術(shù)分別檢測(cè)了 MHCC97H和 HepG2細(xì)胞中 LPAR1-6的表達(dá)情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)， MHCC97H表達(dá)LPAR1、2、5和6，而HepG2表達(dá)LPAR2、3、4、5和6。結(jié)果提示，兩種肝癌細(xì)胞遷移行為對(duì)LPA響應(yīng)的差異可能是由于受體表達(dá)模式不同。進(jìn)一步采用LPAR1/3的特

5、異性抑制劑Ki16425處理MHCC97H細(xì)胞后發(fā)現(xiàn)，LPA促M(fèi)HCC97H細(xì)胞的遷移行為被明顯抑制。實(shí)驗(yàn)表明，LPA可能與MHCC97H細(xì)胞上LPAR1作用介導(dǎo)了細(xì)胞的遷移行為。
　　③ LPA促M(fèi)HCC97H細(xì)胞遷移的相關(guān)機(jī)理
　　為了考察RhoA/ROCK信號(hào)通路在LPA誘導(dǎo)MHCC97H細(xì)胞遷移中的可能作用，實(shí)驗(yàn)采用ROCK抑制劑Y-27632處理后觀察了MHCC97H細(xì)胞遷移對(duì)LPA響應(yīng)的變化。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照組比

6、較，ROCK抑制劑處理明顯抑制了LPA促進(jìn)的MHCC97H遷移能力（p<0.01）。
　　細(xì)胞骨架F-actin在細(xì)胞遷移過(guò)程中起重要作用。為了明確F-actin是否參與了LPA影響MHCC97H細(xì)胞遷移的過(guò)程，采用免疫染色和Western Blot檢測(cè)了LPA作用下F-actin表達(dá)變化。結(jié)果顯示，LPA能夠促進(jìn)MHCC97H細(xì)胞F-actin的表達(dá)；LPAR1/3抑制劑和ROCK抑制劑能分別抑制LPA促進(jìn)的F-actin表達(dá)；

7、用細(xì)胞松弛素B解聚F-actin后，也廢除了LPA對(duì)MHCC97H細(xì)胞遷移的促進(jìn)作用。結(jié)果表明，LPA可能通過(guò)RhoA/ROCK-F-actin信號(hào)通路實(shí)現(xiàn)對(duì)MHCC97H細(xì)胞遷移的誘導(dǎo)作用。
　　進(jìn)一步通過(guò)原子力顯微鏡分析了此過(guò)程中細(xì)胞力學(xué)特性的變化，結(jié)果發(fā)現(xiàn)， LPA處理后MHCC97H的楊氏模量顯著下降，表明LPA能夠降低MHCC97H細(xì)胞硬度，增加細(xì)胞的遷移能力。
　　本文的研究表明， LPA可能與 MHCC97H細(xì)