骨橋蛋白在內(nèi)毒素致大鼠急性肺損傷中的作用研究.pdf

1、目的:采用尾靜脈注射脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)建立大鼠急性肺損傷(actue lung injury,ALI)模型,了解該模型肺組織勻漿中骨橋蛋白(osteopontin,OPN)表達(dá)水平以及OPN對(duì)脂多糖致大鼠急性肺損傷血清中TNF-α、IL-10、IFN-γ和IL-4表達(dá)水平的影響,從而探討OPN在脂多糖致大鼠急性肺損傷中所處的地位與作用。
　　 方法:
　　 1.將56只無(wú)特定病原體級(jí)雄

2、性SD(Sprague Dawley)大鼠,平均體重(200+10)g,按隨機(jī)數(shù)字表分為對(duì)照組8只、ALI組24只、干預(yù)組24只,其中ALI組和干預(yù)組2h、4h、8h各8只。用生理鹽水1ml經(jīng)尾靜脈注入,5分鐘后再尾靜脈注人生理鹽水0.5ml/kg建立對(duì)照組；用LPS6mg/kg加生理鹽水至1ml經(jīng)尾靜脈注入,5分鐘后再經(jīng)尾靜脈注人生理鹽水0.5ml/kg建立大鼠ALI組；用LPS6mg/kg并加生理鹽水至1ml經(jīng)尾靜脈注入,5分鐘后再

3、經(jīng)尾靜脈注射濃度為1:32的Anti-OPN-Ab0.5ml/kg(參考文獻(xiàn)[1]Anti-OPN-Ab按1:32效價(jià)比用抗體稀釋液稀釋并每kg大鼠體重O.5ml應(yīng)用)建立干預(yù)組；以上各組大鼠分別于2小時(shí)、4小時(shí)及8小時(shí)各處死8只。
　　 2.利用動(dòng)脈血PaO2測(cè)定、肺濕重/干重比(wet/dry,W/D)測(cè)定、病理組織學(xué)檢查及肺損傷的評(píng)分等比較各組肺損傷的程度,并評(píng)價(jià)ALI模型的建立。
　　 3.酶聯(lián)免疫吸附(ELIS

4、A)法測(cè)定各組血清TNF-α、IL-10、IFN-γ和IL-4含量。
　　 4.免疫印跡法(Westernblotting)檢測(cè)各組肺組織勻漿中OPN表達(dá)水平,用OPN/β-actin(光密度比值)表示。
　　 結(jié)果:
　　 1.ALI組及干預(yù)組肺與NC組相比:肺濕重/干重比值、肺損傷評(píng)分、血清TNF-α濃度、血清TFN-γ濃度、血清IL-10濃度、血清IL-4濃度、TNF-α/IL-10比值、IFN-γ/IL-

5、4比值及肺組織勻漿OPN表達(dá)均顯著升高(P均<0.05),動(dòng)脈血PaO2卻明顯降低；
　　 2.ALI組的肺W/D比值、肺損傷評(píng)分、血清IFN-γ濃度、血清IL-10濃度、血清IL-4濃度、TNF-α/IL-10比值、IFN-γ/IL-4比值及肺組織勻漿OPN表達(dá)在4小時(shí)顯著高于2小時(shí)及8小時(shí)(P均<0.05),但血清TNF-α濃度2小時(shí)升高最明顯(P均<0.05)；
　　 3.干預(yù)組肺W/D比值、肺損傷評(píng)分、血清TNF

6、-α濃度、血清IFN-γ,濃度、TNF-α/IL-10比值及IFN-γ/IL-4比值均顯著性降低(P均<0.05)；動(dòng)脈血PaO2、血清IL-10濃度及血清IL-4濃度均顯著性升高(P均<0.05)；肺組織勻漿OPN表達(dá)卻無(wú)顯著性降低(P均>0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1.尾靜脈注射LPS能成功誘導(dǎo)大鼠ALI模型,4h時(shí)肺損傷最為明顯和典型。
　　 2.OPN在LPS致大鼠ALI肺組織中表達(dá)明顯增加。鼠AL