涼膈散對(duì)內(nèi)毒素致急性肺損傷大鼠肺水通道蛋白表達(dá)的影響.pdf

1、目的與意義:
　　 急性肺損傷(Acute lung injury,ALI)是指由嚴(yán)重感染、創(chuàng)傷、休克和誤吸等多種因素引起肺組織結(jié)構(gòu)發(fā)生特征性的病理改變而出現(xiàn)的一種臨床綜合癥。肺水腫為其常見(jiàn)的一種臨床癥狀,主要因?yàn)槭欠闻菝?xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞和肺泡上皮細(xì)胞的損傷,肺臟的液體平衡遭到破壞,肺水屏障受損,通透性增高,肺血管與間質(zhì)之間的液體交換障礙,使液體聚積于肺泡和間質(zhì)間隙,導(dǎo)致滲透性肺水腫。抑制或減輕肺水腫可成為臨床上預(yù)防或治療ALI的

2、一種可行方法。
　　 涼膈散載宋《太平惠民和劑局方》,為溫病治療常用名方。以往研究發(fā)現(xiàn),該方有較好的抗內(nèi)毒素肺損傷作用。本實(shí)驗(yàn)結(jié)合中醫(yī)臟象理論和現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對(duì)ALI病機(jī)的認(rèn)識(shí),針對(duì)ALI時(shí)肺水腫的病理狀態(tài),從水的跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)角度出發(fā),通過(guò)觀察涼膈散對(duì)脂多糖(lipopolysaeeharide,LPS)誘導(dǎo)大鼠ALI肺水腫及肺水通道蛋白(aquaporin,AQP)1、5表達(dá)的影響,來(lái)探討該方對(duì)內(nèi)毒素ALI肺水腫的保護(hù)作用及其可能作用機(jī)

3、制,為涼膈散防治ALI提供實(shí)驗(yàn)依據(jù),亦為中西醫(yī)結(jié)合防治ALI提出新思路。
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)果:
　　 1 涼膈散對(duì)內(nèi)毒素誘發(fā)大鼠ALI肺水腫的保護(hù)作用
　　 1.1 肺水含量(W/D)的變化
　　 各組間的W/D值有顯著性差異(F=64.453,P=0.000),各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的W/D值有顯著性差異(F=88.758,P=0.000),組間和時(shí)間點(diǎn)存在交互作用(F=8.286,P=0.000)。分析各個(gè)時(shí)間點(diǎn)各組

4、的單獨(dú)效應(yīng),與對(duì)照組比較,LPS組大鼠W/D值在LPS誘發(fā)2h后開(kāi)始顯著升高(P<0.05),隨后逐漸增加。與LPS組相比,2h點(diǎn)涼膈散高劑量組、地塞米松組及4、8、16h點(diǎn)涼膈散高、中、低劑量組、地塞米松組大鼠W/D值顯著降低(P<0.05)。
　　 1.2 肺系數(shù)(LI)的變化
　　 各組間的LI有顯著性差異(F=56.477,P=0.000),各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的LI有顯著性差異(F=101.092,P=0.000),組間

5、和時(shí)間點(diǎn)存在交互作用(F=5.912,P=0.000)。分析各個(gè)時(shí)間點(diǎn)各組的單獨(dú)效應(yīng),與對(duì)照組比較,LPS誘導(dǎo)大鼠損傷后2h,LPS組大鼠LI值開(kāi)始顯著升高(P<0.05),隨后逐漸增加。與LPS組相比,2h點(diǎn)涼膈散高劑量組、地塞米松組及4、8、16h點(diǎn)涼膈散高、中、低劑量組、地塞米松組大鼠LI值顯著降低(P<0.05)。
　　 1.3 全血液粘度的變化
　　 不同切變率的血液粘度有顯著性差異(F=3250.550,P=

6、0.000),切變率與分組(F=17.984,P=0.000)和各時(shí)間點(diǎn)(F=54.277,P=0.000)均存在交互作用。固定切變率,逐一做分組和個(gè)時(shí)間點(diǎn)的析因分析,各組間血液粘度有顯著性差異(150s-1,F=20.937,P=0.000；30s-1,F=19.783,P=0.000；5s-1,F=12.168,P=0.000；1s-1,F=21.364,P=0.000),各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的血液粘度有顯著性差異(150s-1,F=84.0

7、14,P=0.000；30s-1,F=77.053,P=0.000；5s-1,F=65.249,P=0.000；1s-1,F=70.784,P=0.000),分組與各個(gè)時(shí)間點(diǎn)間存在交互作用(150s-1,F=7.045,P=0.000；30s-1,F=6.578,P=0.000；5s-1,F=5.533,P=0.000；1s-1,F=6.083,P=0.000)。分析各組間的單獨(dú)效應(yīng),LPS誘導(dǎo)大鼠損傷后,LPS組在切變率(150s-1

8、、30s-1、5s-1)測(cè)定的全血粘度在1h、2h時(shí)均顯著高于對(duì)照組(P<0.05),LPS組在切變率1s-1測(cè)定的全血粘度1h時(shí)顯著高于對(duì)照組(P<0.05),LPS組在各個(gè)切變率測(cè)定下的全血粘度在4h點(diǎn)時(shí)與對(duì)照組比較無(wú)顯著性差異,在8、16h點(diǎn)時(shí),LPS組大鼠全血粘度均顯著低于對(duì)照組(P<0.05)。在各個(gè)切變率測(cè)定下的全血粘度,1h點(diǎn)涼膈散高、中、低劑量組,2h點(diǎn)涼膈散高、中劑量組及4h點(diǎn)涼膈散高劑量組大鼠比對(duì)照組大鼠全血粘度明顯

9、升高(P<0.05),在各個(gè)切變率測(cè)定的全血粘度,地塞米松組在1、2、4h點(diǎn)時(shí)大鼠全血粘度相對(duì)對(duì)照組沒(méi)有發(fā)生顯著的變化。各個(gè)切變率測(cè)定全血粘度8h點(diǎn)涼膈散高、中、低劑量組、地塞米松組及16h點(diǎn)涼膈散高、中劑量組、地塞米松組大鼠全血粘度顯著高于LPS組(P<0.05),與對(duì)照組全血粘度接近。
　　 1.4 肺組織病理的改變
　　 肺大體觀察,大鼠LPS致?lián)p傷后2h,雙肺體積增大,明顯肺水腫。隨著時(shí)間的延長(zhǎng),肺水腫程度越來(lái)越

10、明顯,表面廣泛分布斑點(diǎn)狀紅色出血灶。光鏡下可見(jiàn)肺泡隔增厚,肺間質(zhì)及肺泡水腫,出血,并有大量炎性細(xì)胞的浸潤(rùn),部分肺不張,肺泡結(jié)構(gòu)破壞。涼膈散各劑量組及地塞米松組鏡下觀察表明可不同程度的減少肺泡間隔和炎性細(xì)胞的浸潤(rùn)。對(duì)照組肺泡結(jié)構(gòu)完整、清晰,無(wú)滲出。
　　 2 涼膈散對(duì)內(nèi)毒素誘發(fā)大鼠ALI肺組織AQP-1、AQP-5表達(dá)的影響
　　 2.1 AQP-1免疫組化檢測(cè)結(jié)果
　　 結(jié)果：顯示,AQP-1主要表達(dá)于肺血管內(nèi)和

11、肺泡Ⅱ型細(xì)胞上,但主要表達(dá)于肺血管內(nèi),支氣管內(nèi)皮也有表達(dá)。對(duì)照組中,AQP-1呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá),呈棕黃色。各組間的AQP-1表達(dá)有顯著性差異(F=15.109,P=0.000),各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的AQP-1表達(dá)有顯著性差異(F=3.338,P=0.012),組間和時(shí)間點(diǎn)不存在交互作用(F=0.384,P=0.992)。分析各組間的主效應(yīng),對(duì)照組與LPS組AQP1的表達(dá)有顯著性差異(P<0.05),與LPS組相比,涼膈散高、中、低劑量組、地塞米松組

12、可顯著增強(qiáng)AQP-1的表達(dá)(P<0.05)。
　　 2.2 AQP-5免疫組化檢測(cè)結(jié)果
　　 結(jié)果：顯示,AQP-5主要分布于肺泡Ⅰ型細(xì)胞膜表面,在正常對(duì)照組中為強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá),呈棕黃色。各組間的AQP-5表達(dá)有顯著性差異(F=14.056,P=0.000),各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的AQP-5表達(dá)有顯著性差異(F=5.831,P=0.000),組間和時(shí)間點(diǎn)不存在交互作用(F=0.656,P=0.863)。分析各組間的主效應(yīng),對(duì)照組與LP

13、S組AQP-5表達(dá)有顯著性差異(P<0.05),與LPS組相比,涼膈散高、中、低劑量組、地塞米松組可顯著增強(qiáng)AQP-5的表達(dá)(P<0.05)。
　　 2.3 AQP-1 Western Blot檢測(cè)結(jié)果
　　 各組間的AQP-1蛋白表達(dá)有顯著性差異(F=22.822,P=0.000),各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的AQP-1蛋白表達(dá)有顯著性差異(F=12.152,P=0.000),組間和時(shí)間點(diǎn)不存在交互作用(F=0.822,P=0.684

14、)。分析各組間的主效應(yīng),對(duì)照組與LPS組AQP-1蛋白表達(dá)有顯著性差異(P<0.05),與LPS組相比,涼膈散高、中、低劑量組、地塞米松組可顯著增強(qiáng)AQP-1蛋白的表達(dá)(P<0.05)。
　　 2.4 AQP-5 Western Blot檢測(cè)結(jié)果
　　 各組間的AQP-5蛋白表達(dá)有顯著性差異(F=24.245,P=0.000),各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的AQP-5蛋白表達(dá)有顯著性差異(F=22.809,P=0.000),組間和時(shí)間點(diǎn)不

15、存在交互作用(F=1.299,P=0.684188)。分析各組間的主效應(yīng),對(duì)照組與LPS組AQP-5蛋白表達(dá)有顯著性差異(P<0.05),與LPS組相比,涼膈散高、中、低劑量組、地塞米松組可顯著增強(qiáng)AQP-5蛋白的表達(dá)(P<0.05)。
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)論:
　　 1、內(nèi)毒素誘發(fā)大鼠急性肺損傷后,大鼠肺組織肺水含量(W/D)及肺系數(shù)(LI)顯著升高,涼膈散可抑制內(nèi)毒素誘發(fā)大鼠急性肺損傷時(shí)肺組織肺水含量(W/D)及肺系數(shù)(LI