溶血磷脂酰膽堿對血管平滑肌細(xì)胞的增殖作用及其信號通路.pdf

1、目的：研究溶血磷脂酰膽堿(LPC)對人血管平滑肌細(xì)胞的增殖作用,并闡明其受體介導(dǎo)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)理。
　　 內(nèi)容培養(yǎng)的人大動脈平滑肌細(xì)胞,用LPA和LPC及LPA受體特異性拮抗劑Ki16425和Gi蛋白特異性抑制劑PTX刺激2-3d,MTT比色法觀察AoSMCs增殖;實(shí)時(shí)熒光定量PCR分析LPA受體和Autotaxin的基因表達(dá)量;采用蛋白印跡技術(shù)檢測血管平滑肌細(xì)胞在受到L,PA、LPC、Ki16425和PTX刺激后,觀察ERK1/2

2、在磷酸化程度上的差別。
　　 結(jié)果： MTT法顯示LPA、LPC均能促進(jìn)AoSMCs增殖,且Ki16425和PTX均能抑制它們的增殖作用。熒光定量RT-PCR結(jié)果表明,在AoSMCs細(xì)胞中,LPA1-5五個(gè)受體均有表達(dá),其中LPA1受體的表達(dá)量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于其它幾個(gè)受體。Autotaxin基因在血管平滑肌細(xì)胞中大量表達(dá),并且顯示出很高的磷脂酶D活性,使LPC轉(zhuǎn)化為LPA。Western blot結(jié)果表明,用LPA、LPC和PDGF單獨(dú)

3、刺激AoSMC細(xì)胞均能使ERK1/2信號通路活化。與Ki16425同時(shí)作用和PTX預(yù)處理AoSMC細(xì)胞時(shí),LPA和LPC誘導(dǎo)的p-ERK1/2水平明顯降低,而PDGF誘導(dǎo)的ERK1/2磷酸化水平未受影響。
　　 結(jié)論：1)研究首次發(fā)現(xiàn),血管平滑肌細(xì)胞本身表達(dá)的Autotaxin參與由LPC刺激細(xì)胞的增殖作用。在細(xì)胞和細(xì)胞培養(yǎng)液中均檢測到Autotaxin的蛋白表達(dá)和磷脂酶D的活性。2)LPC在胞外通過LPC-LPA1和LPC-L