Wnt-β-catenin信號轉(zhuǎn)導通路在高脂血癥致血管平滑肌細胞增殖中的作用的研究.pdf

1、第一部分:大鼠高脂血癥模型的建立及wnt/β-catenin信號通路在該模型中的激活情況
　　 目的:建立大鼠高脂血癥模型,觀察活體內(nèi)高脂刺激下血管平滑肌細胞內(nèi)wnt/β-catenin信號通路的激活及血管平滑肌細胞增殖情況,探討活體內(nèi)wnt/β-catenin信號通路的激活與血管平滑肌細胞增殖的關系。
　　 方法：以雄性SD大鼠為研究對象,體重200～250g。通過飲食飼以高脂飼料建立高脂血癥模型。12周后處死大鼠,獲

2、取主動脈。蘇丹Ⅲ染色檢測血管壁粥樣硬化病變,HE染色、透射電鏡檢測血管平滑肌細胞增殖及表型變化,實時定量RT-PCR及Western Blot檢測β-catcnin、T cell factor4(TCF-4)、cyclin D1的變化。
　　 結果：通過2個月的高脂飲食飼養(yǎng),成功建立大鼠高脂血癥模型,但大鼠主動脈壁粥樣硬化病變不明顯。高脂刺激下,mRNA及蛋白水平的β-catenin、TCF-4、cyclin D1表達均增加；同

3、時血管壁內(nèi)平滑肌細胞增殖增加、表型由收縮型向合成型變化。
　　 結論：高脂飲食可以成功建立大鼠高脂血癥模型,但由于大鼠本身的代謝特點,不容易出現(xiàn)動脈粥樣硬化斑塊。wnt/β-catenin信號通路在高脂情況下被激活,同時平滑肌細胞增殖增加、表型改變,提示wnt/β-catenin信號通路的激活與平滑肌細胞增殖之間存在聯(lián)系。
　　 第二部分:Wnt/βcatenin信號通路在高脂血清培養(yǎng)的血管平滑肌細胞中的激活情況

4、　　 目的:通過高脂血清培養(yǎng)大鼠血管平滑肌細胞,觀察高脂刺激下血管平滑肌細胞內(nèi)wnt/β-catenin信號通路的激活及血管平滑肌增殖情況,細胞水平下探討Wnt/β-catenin信號通路的激活與血管平滑肌細胞增殖的關系。
　　 方法：以組織貼塊法培養(yǎng)獲取原代大鼠血管平滑肌細胞,給予高脂血清刺激,實時定量RT-PCR及Western Blot檢測β-catenin、TCF-4、cyclin D1的變化。流式細胞儀檢測血管平滑肌

5、細胞凋亡及細胞周期的變化,MTT檢測細胞增殖情況。
　　 結果：成功獲取并培養(yǎng)大鼠血管平滑肌細胞。在高脂血清的刺激下,mRNA及蛋白水平的β-catenin、TCF-4、cyclin D1表達均增加；血管平滑肌細胞增殖活躍,S期細胞數(shù)量明顯增加,凋亡細胞減少。
　　 結論：組織貼塊法能夠成功獲取并培養(yǎng)原代大鼠血管平滑肌細胞,該方法簡便易行。Wnt/β-catenin信號通路在高脂血清刺激下被激活,同時平滑肌細胞增殖增加,

6、在細胞水平提示wnt/β-catenin信號通路的激活與平滑肌細胞增殖之間存在聯(lián)系。
　　 第三部分:Wnt/β-catenin通路阻斷對高脂血清培養(yǎng)的血管平滑肌細胞增殖的影響
　　 目的: 通過高脂血清培養(yǎng)大鼠血管平滑肌細胞,并給予wnt/β-catenin信號通路阻斷劑,觀察通路阻斷情況下血管平滑肌細胞內(nèi)wnt/β-catenin信號通路的激活及平滑肌細胞增殖情況,進一步探討wnt/β-catenin信號通路的激活與

7、血管平滑肌細胞增殖的關系。
　　 方法：高脂血清培養(yǎng)血管平滑肌細胞的同時給予wnt阻斷劑Dickkopf-1(Dkk-1),實時定量RT-PCR及Western Blot檢測β-catenin、TCF-4、cyclin D1的變化。流式細胞儀檢測血管平滑肌細胞凋亡及細胞周期的變化,MTT檢測細胞增殖情況。
　　 結果：在Dkk-1的作用下,mRNA及蛋白水平β-catenin、TCF-4、cyclin D1表達均較高脂血