氟伐他汀對溶血磷脂酰膽堿誘導(dǎo)動脈平滑肌細胞增殖與凋亡相關(guān)基因表達的影響.pdf

1、目的：觀察氟伐他汀對溶血磷脂酰膽堿(LPC)誘導(dǎo)人臍動脈血管平滑肌細胞(HUASMC)增殖及凋亡相關(guān)基因的影響并探討其機制，為他汀類藥物的臨床應(yīng)用提供實驗依據(jù)。 方法：原代培養(yǎng)人臍動脈平滑肌細胞待細胞生長融合后，用無血清DMEM培養(yǎng)液培養(yǎng)24h，使細胞同步化后分組進行實驗。隨機分成正常對照組、LPC組、氟伐他汀預(yù)孵育組，氟伐他汀預(yù)孵育組按濃度不同又分為10-5mol·L-1、10-6mol·L-1、10-7mol·L-1，相同濃

2、度(10-6mol·L-1)氟伐他汀按時間不同又分為6h、12h、24h、48h、72h。用細胞計數(shù)和MTT比色法檢測細胞增殖及細胞活力；比色法檢測細胞和細胞培養(yǎng)液中NO的含量；Hoechst-33258染色法觀察細胞凋亡情況；流式細胞儀測定細胞凋亡和細胞周期分布；免疫組織化學(xué)染色方法和RT-PCR測定血管平滑肌凋亡相關(guān)因子Survivin、Fas的表達。 結(jié)果： (1)溶血磷脂酰膽堿促進細胞增殖，使細胞數(shù)量和增殖指數(shù)增

3、大，氟伐他汀能抑制5mg·L-1，溶血磷脂酰膽堿(LPC)對血管平滑肌細胞的增殖作用，使細胞NO釋放量增加，細胞數(shù)量和增殖指數(shù)減少； (2)流式細胞儀觀察LPC組血管平滑肌細胞處于DNA合成期和分裂期，S期的百分數(shù)高于對照組，氟伐他汀預(yù)孵育后使血管平滑肌細胞周期中的G0/G1期細胞比例增多，S期細胞比例減少，細胞凋亡率較對照組升高。 (3)Hoechst-33258染色法發(fā)現(xiàn)：氟伐他汀誘導(dǎo)血管平滑肌細胞產(chǎn)生凋亡，隨著作用

4、時間延長和濃度增大細胞凋亡發(fā)生率增加，可見大量血管平滑肌細胞發(fā)生核碎裂和核邊聚現(xiàn)象。 (4)LPC增加Survivin的表達，細胞內(nèi)可見大量棕黃色顆粒，氟伐他汀預(yù)孵育組6h時Survivin.表達開始下降，24h下降最明顯；Fas基因早期表達不明顯，到48h、72h后明顯表達。 結(jié)論：氟伐他汀抑制LPC促HUASMC增殖作用，促進細胞發(fā)生凋亡，血管平滑肌細胞凋亡率升高，其促凋亡作用主要與上調(diào)FasmRNA表達，下調(diào)Sur