野百合堿誘導(dǎo)的大鼠肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增殖、凋亡及survivin表達(dá)的相關(guān)研究.pdf

1、目的：
　　 本實(shí)驗(yàn)通過(guò)建立野百合堿(MCT)誘導(dǎo)的肺動(dòng)脈高壓(PH)大鼠模型,研究該模型肺血管構(gòu)型重建過(guò)程中肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增殖與凋亡的關(guān)系,并探討凋亡抑制因子survivin在肺血管構(gòu)型重建(PVSR)中的表達(dá)和意義,為改善PH患者的臨床癥狀提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法：
　　 將40只大鼠隨機(jī)分為2組:Control組(n=20)為生理鹽水對(duì)照組和MCT組(n=20)為野百合堿實(shí)驗(yàn)組。MCT組采用MCT誘導(dǎo)建

2、立肺動(dòng)脈高壓大鼠模型,Control組注射等量生理鹽水。Control組和MCT組在建模后2周[2周Control組(n=10)和2周MCT組(n=10)]和4周[(4周Control組(n=10)和4周MCT。組(n=10)]兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)分別對(duì)各組大鼠,通過(guò)右心導(dǎo)管法檢測(cè)肺動(dòng)脈平均壓(mPAP),之后處死動(dòng)物,收集標(biāo)本分別計(jì)算右心室肥厚指數(shù)(RVHI),HE染色法觀察肺小動(dòng)脈結(jié)構(gòu)、測(cè)量小動(dòng)脈管徑及管壁厚度、計(jì)算管壁厚度與血管外徑比值(W

3、T％)以反映肺血管的形態(tài)學(xué)改變情況,應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色法檢測(cè)增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)的表達(dá),以反映肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞(PASMCs)增殖情況,并使用原位缺口末端DNA標(biāo)記技術(shù)(TUNEL法)檢測(cè)肺小動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞的凋亡情況,分別計(jì)算增殖指數(shù)(PI)、凋亡指數(shù)(AI)及PI/AI。應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色和Western Blot檢測(cè)大鼠肺小動(dòng)脈組織中survivin的表達(dá)。
　　 結(jié)果：
　　 1.MCT組mPAP、WT％

4、明顯高于Control組(2周MCT組P＜0.05,4周MCT組P＜0.001),4周MCT組以上各項(xiàng)指標(biāo)明顯高于2周MCT組(P＜0.01)。4周MCT組RVHI明顯高于4周Control組(P＜0.01),2周MCT組RVHI和2周Control相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05),4周MCT組RVHI明顯高于2周MCT組。HE染色標(biāo)本上可見(jiàn),2周MCT組、4周MCT組肺動(dòng)脈肌層及內(nèi)膜均有不同程度的增厚,以管腔狹窄、肺動(dòng)脈重構(gòu)明顯,Co

5、ntrol組血管內(nèi)膜光滑、內(nèi)皮細(xì)胞連續(xù),管壁薄,厚度均勻一致。
　　 2.與Control組相比MCT組PI、AI均明顯升高(P＜0.01),且PI/AI比值也明顯升高(P＜0.01)。4周MCT組PI、PI/AI明顯高于2周MCT組(P＜0.01),4周MCT組AI高于2周MCT組(P＜0.05),PI/AI與WT％成顯著正相關(guān)(r=0.881,P＜0.001)。
　　 3.免疫組織化學(xué)染色及Western blot檢

6、測(cè)結(jié)果顯示:MCT組免疫組織化學(xué)染色(IH)分值及Wester Blot(WB)IOD值顯著高于Control組(P＜0.001),4周MCT組以上指標(biāo)均明顯高于2周MCT組(P＜0.01)。Survivin蛋白表達(dá)與WT％、PI/AI比值呈顯著正相關(guān)(r=0.78,P＜0.001；r=0.948,P＜0.001)。
　　 結(jié)論：
　　 1.PH的形成過(guò)程中,肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞的增殖與凋亡都明顯增加,但增殖與凋亡的比例也明