黃芩素通過抑制血管重構(gòu)改善野百合堿誘導(dǎo)的大鼠肺動脈高壓.pdf

1、背景與目的：
　　肺動脈高壓（pulmonary artery hypertension, PAH）是一種極具破壞性的心肺疾病，發(fā)病率和死亡率均高，其病理特點是肺血管重構(gòu)造成肺動脈壓力（pulmonary arterial pressure, PAP）增高，繼而造成右心室肥厚（right ventricular hypertrophy, RVH），最終導(dǎo)致右心室衰竭，甚至死亡。所以，逆轉(zhuǎn)血管重構(gòu)就是治療 PAH的關(guān)鍵。在肺血管重構(gòu)

2、過程中，肺動脈不同細胞的增殖/凋亡失衡和炎癥反應(yīng)起著至關(guān)重要的作用。黃芩素是一種黃酮類化合物，藥理學(xué)作用廣泛，具有抗增殖，抗炎和心臟保護作用，其作用與MAPK信號通路和NF-κB信號通路緊密相關(guān)。但是，黃芩素對PAH是否有治療作用，其作用機制如何，目前尚不明確。因此本研究旨在探討黃芩素對MCT誘導(dǎo)的PAH大鼠血管重構(gòu)的影響及初步機制。
　　方法：
　　1.雄性SD大鼠隨機分為4個組，每組10只：對照組、MCT組、MCT+黃芩

3、素（50 mg/kg/d）組、MCT+黃芩素（100 mg/kg/d）組。SD大鼠皮下注射MCT造PAH模型后，于第14天開始灌胃給予不同劑量黃芩素，直至第28天，測定大鼠血流動力學(xué)變化后處死大鼠，測定右心室肥厚指數(shù)，觀察肺形態(tài)變化。
　　2.用蘇木精-伊紅染色法（hematoxylin and eosin high performance liquid, H&E）和 Masson染色法觀察并計算肺小動脈的中膜和肺動脈壁厚度。同時

4、，通過H&E染色法測量右心室自由壁厚度和心肌細胞的大小，以觀察肺動脈和右心室的重構(gòu)。
　　3.用 H&E染色觀察肺組織中的炎癥反應(yīng)；用定量反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction，qRT-PCR)法檢測肺組織中腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor alpha, TNF-α)、白細胞介素-1β(interle

5、ukin-1
　　beta, IL-1β)、白細胞介素-6(interleukin-6, IL-6)等炎癥因子的mRNA表達。
　　4.用TdT介導(dǎo)的缺口末端標(biāo)記法(TdT mediated nick dUTP end-labeling, TUNEL)觀察肺組織細胞凋亡，用Western Blot測定肺Bcl-2、Bax、活化型半胱氨酸蛋白酶-3（cleaved caspase-3）等凋亡相關(guān)蛋白表達。
　　5.用蛋白

6、免疫印跡法測定促絲裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase, MAPK）和核因子-κB（nuclear factor-κB, NF-κB）信號通路的蛋白表達。
　　結(jié)果：
　　1.黃芩素可改善MCT導(dǎo)致的PAH和右心室肥厚。與對照組比較，MCT組右心室收縮壓顯著升高，右心室肥厚指數(shù)、右心室/體重的比值均顯著增高，右心室自由壁顯著增厚，右心室心肌細胞肥大且分布雜亂無序，而黃芩素可有效改

7、善上述病理改變。
　　2.黃芩素可抑制MCT誘導(dǎo)的肺動脈重構(gòu)。 H&E和 Masson染色法結(jié)果顯示， MCT可導(dǎo)致肺動脈重構(gòu)和纖維化，肺動脈管壁厚度指數(shù)：（肺動脈管壁厚度占管徑的百分比）WT％和（管壁面積占血管總面積的百分比）WA%值明顯增高，黃芩素可以有效改善上述指標(biāo)變化。
　　3.黃芩素可抑制MCT誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)。H&E染色結(jié)果顯示，MCT組大鼠肺組織中血管和支氣管周圍有明顯的炎性細胞浸潤，而黃芩素減弱此炎癥反應(yīng)。qR

8、T-PCR結(jié)果表明，黃芩素可降低 MCT所致的肺組織炎癥細胞因子 IL-6、TNF-α和 IL-1βmRNA表達的增高。
　　4.黃芩素可抑制MCT誘導(dǎo)的細胞凋亡。TUNEL染色法結(jié)果表明，與對照組相比，MCT組凋亡細胞平均百分比顯著增多，而黃芩素顯著減少 TUNEL陽性細胞平均百分比。Western Blot結(jié)果表明，黃芩素可降低MCT所致肺組織Bax/Bcl-2比率和cleaved caspase-3表達的上調(diào)。
　　5

9、.黃芩素可抑制MCT誘導(dǎo)的MAPK和 NF-κB信號通路的激活。Western Blot結(jié)果表明，與對照組相比，MCT組大鼠的肺組織中p38, ERK和 JNK磷酸化顯著增強，而黃芩素給藥組中p38, ERK和 JNK磷酸化顯著被抑制。與對照組相比，MCT組大鼠肺組織NF-κB p65表達顯著增高，而黃芩素可顯著抑制MCT誘導(dǎo)的NF-κB上
　　調(diào)。
　　結(jié)論：
　　1.黃芩素可改善MCT誘導(dǎo)的PAH和右心室肥厚，其保