肝癌細(xì)胞中腫瘤基因P53-MDM2-P21與HBV關(guān)系的研究.pdf

1、第二軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文肝癌細(xì)胞中腫瘤基因P53MDM2P21與HBV關(guān)系的研究姓名：曲建慧申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：病理學(xué)與病理生理學(xué)指導(dǎo)教師：朱明華20030401第二軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文中文摘要在不依賴于P53的途徑對(duì)P21的活化表達(dá)具有促進(jìn)作用；而在Hep3B細(xì)胞，由于P53全基因缺失，細(xì)胞中無(wú)P53蛋白表達(dá)，P21蛋白以及P21一LUC報(bào)告基因處于相對(duì)較低水平：HCC9204細(xì)胞中存在低水平的P53與P21蛋白表達(dá)；與HepG2

2、細(xì)胞相比，HepG2215較HepG2具有較高的P53、P21蛋白表達(dá)，而且報(bào)告基因PGl3一CAT、P21一LUC在HepG2215細(xì)胞中表達(dá)均高于HepG2細(xì)胞，考慮這可能與細(xì)胞中HBV的復(fù)制有關(guān)。HBV在細(xì)胞內(nèi)的復(fù)制可能通過(guò)P53依賴或非依賴的途徑對(duì)P21具有促進(jìn)作用。從MDM2的表達(dá)情況來(lái)看，發(fā)現(xiàn)肋M(jìn)2與P53的表達(dá)具有相反的趨勢(shì)：在MDM2表達(dá)偏低的細(xì)胞，P53表達(dá)偏高，如PLc／PRF／5，HepG2(HepG2215)細(xì)胞

3、；而在MI)M2高表達(dá)的HCC9204、Hep3B細(xì)胞，P53表達(dá)偏低或無(wú)表達(dá)。說(shuō)明MDM2對(duì)于野生型或變異型P53可能都具有降解作用。選用HepG2、tepG2215、Hep3B、PLc／PRF／5四種肝癌細(xì)胞系。分別給予一定劑量的紫外線照射，Westernblot方法檢測(cè)P53蛋白表達(dá)的改變，用3H摻入法通過(guò)檢測(cè)細(xì)胞的程序外DNA合成，觀察各細(xì)胞DNA切除損傷修復(fù)能力。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，PLC／PRF／5細(xì)胞在紫外線照射前后P53蛋白表達(dá)沒(méi)

4、有明顯改變；Hep3B細(xì)胞照射前后P53蛋白均無(wú)表達(dá)：在HepG2、HepG2215細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)紫外線照射后的P53蛋白表達(dá)明顯增強(qiáng)。HepG2、HepG2215細(xì)胞對(duì)紫外線誘導(dǎo)的DNA損傷修復(fù)能力明顯高于PLC／PRF／5、Hep3B細(xì)胞。說(shuō)明在具有P53活性表達(dá)的細(xì)胞，紫外線照射可以通過(guò)活化細(xì)胞內(nèi)P53，促進(jìn)細(xì)胞的DNA損傷修復(fù)，幫助細(xì)胞度過(guò)損傷。HepG2細(xì)胞的DNA切除損傷修復(fù)能力相對(duì)強(qiáng)予HepG2215細(xì)胞，這可能與HepG22

5、15細(xì)胞中HBV的復(fù)制有關(guān)，提示HBV通過(guò)干擾損傷DNA修復(fù)，而與肝癌的發(fā)生有關(guān)。二、HBV與P53作用關(guān)系初步研究在上面實(shí)驗(yàn)中，發(fā)現(xiàn)HepG2215細(xì)胞中P53活性以及P53／P21表達(dá)較HepG2明顯增高，本實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步比較了HepG2與HepG2215細(xì)胞生物學(xué)活性以及成瘤性，并在7721肝癌細(xì)胞系中，通過(guò)細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)染HBV與P53質(zhì)粒，觀察了HBV對(duì)P53活性、蛋白表達(dá)以及對(duì)P53下游基因P21基因啟動(dòng)子的影響，以及P53對(duì)HBV病